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猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，PRRSV)感染引起的一种以怀孕母猪发生流产、早产和死胎等严重的繁殖障碍和仔猪与育肥猪的呼吸道症状为特征的传染病。本研究成功克隆并表达了PRRSV非结构蛋白Nsp9和Nsp10基因，利用原核表达的重组蛋白Nsp9和Nsp10建立了检测PRRSV非结构蛋白抗体的间接ELISA方法。
采用PCR技术从质粒pSK-B2和pGEM-C上分别扩增出PRRSV的Nsp9和Nsp10基因，将目的片段分别克隆到原核表达载体pET-28a(+)，经0.1mmol/LIPTG诱导后，重组蛋白Nsp9和Nsp10的表达量可达全细菌蛋白的33.2％和30.8％，SDS-PAGE分析表明，表达产物的分子量分别为27.3kD和31.5kD。Western-Blotting分析表明，两种重组蛋白均可被PRRSV阳性血清所识别。
以纯化的重组蛋白Nsp9和Nsp10为抗原，分别建立了检测PRRSVNsp9和Nsp10抗体的间接ELISA方法，并确定了两种间接ELISA反应的最佳工作条件。结果表明，重组蛋白抗原的最适包被浓度均为0.1μg/mL；待检血清的最适稀释度均为1：40；HRP-兔抗猪IgG的最适工作浓度均为1：800；待检血清和酶标二抗的反应条件均为37℃30min；血清样本的阴阳性临界值分别为0.35和0.40。用建立的间接ELISA方法对实验感染PRRSV的猪血清中的Nsp9和Nsp10蛋白抗体进行了分析，结果表明，PRRSV感染后42天可检测到Nsp9和Nsp10蛋白的抗体。用建立的间接ELISA方法对接种PRRSV灭活苗猪群仔培猪和PRRSV感染猪群的血清样本进行了分析，结果表明建立的检测PRRSV非结构蛋白抗体的ELISA方法基本可以用于区分自然感染猪和灭活疫苗免疫猪。