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目的:乳腺癌化疗过程中多药耐药性的高发和膜蛋白相关,其中包括P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)和转铁蛋白受体(Transferrin receptor,Tf R)。有研究表明P-gp蛋白能够将化疗药物从乳腺癌肿瘤细胞内泵出到细胞外,它的过度表达与肿瘤多药耐药相关。Tf R蛋白参与铁的吸收并在细胞生长和细胞增殖方面发挥作用,已有很多文献报导Tf R蛋白在许多种癌症包括乳腺癌中过度表达并且耐药细胞和产生耐药的乳腺癌组织中表达量更多。准确定量测定乳腺癌中P-gp蛋白和Tf R蛋白的含量将有助于改善肿瘤的早期检测诊断和预测乳腺癌患者的化疗效果及预后评估。方法:利用基于LC-MS/MS的定向蛋白组学液质串联技术建立对P-gp蛋白和Tf R蛋白定量检测的方法,用于测定乳腺癌细胞系和乳腺癌组织中P-gp蛋白和Tf R蛋白的含量。结果:1.434STTVQLMQR442,674GSQAQDR680和368IIDNKPSIDSYSK380这三个肽段是P-gp蛋白胰蛋白酶水解的特异性肽段,选取434STTVQLMQR442代替P-gp蛋白作为研究目标物进行定量,建立P-gp蛋白定量检测MRM条件,采用内标法用稳定同位素标记的肽段STTV*QLMQR为内标物并准确测定了乳腺癌细胞系MCF-7/WT和乳腺癌耐药细胞系MCF-7/ADR中P-gp蛋白的含量。实验结果与传统的免疫学方法的结果进行对比,包括激光共聚焦技术、蛋白免疫印迹和流式细胞术。最后,利用建立的定量方法对60对产生化疗药物耐受的乳腺癌病人的癌组织和癌旁组织中的P-gp蛋白含量进行了定量检测。2.选取681VEYHFLSPYVSPK693代替Tf R蛋白本身作为研究目标物进行定量,建立Tf R蛋白定量检测MRM条件,采用内标法用稳定同位素标记的肽段V*EYHFLSPYVSPK为内标物。质量控制数据结果显示可接受的准确度和精密度范围,最后利用建立的方法准确测定了三个乳腺癌细胞系和36对乳腺癌病人的癌组织和癌旁组织中Tf R蛋白的含量。实验结果与激光共聚焦技术、蛋白免疫印迹、流式细胞术和组织免疫化学方法所得结果进行比较。结论:基于定向蛋白组学的液质串联质谱技术能准确定量细胞和临床组织样本中的P-gp蛋白和Tf R蛋白,并能应用于低浓度的临床样本的测定。这种方法为将来大规模测定大分子生物标志物提供了一种可能。总而言之,液质串联质谱分析手段具有快速经济、定量限低、灵敏度高、选择性强等优点,尤其是在测定低浓度以及生物样本时更能得到较为可靠的数据。实践证明,液质串联质谱技术能够作为一种有效的定量分析手段应用于临床样本的检测。