论文部分内容阅读
【目的】观察高糖环境对人腹膜间皮细胞（human peritoneal mesothelial cells,HPMCs）的损伤作用以及高糖环境对内源性硫化氢（hydrogen sulfide, H2S）分泌的影响并探讨其可能的机制；进一步观察外源性H2S对高糖环境诱导人腹膜间皮细胞损伤的保护作用并探讨其可能的机制。【方法】体外培养人腹膜间皮细胞株HMrSV5细胞，用4.25%D-葡萄糖（高糖）、4.25%甘露醇和5×10-5、10-4、5×10-4、10-3和5×10-3mol/L的外源性H2S供体硫化氢钠（sodium bisulfide, NaHS）处理人腹膜间皮细胞株HMrSV5细胞24小时。采用四甲基偶氮唑盐（methyl thiazolyl tetrazolium, MTT）比色法检测细胞活力。采用分光光度法检测细胞培养液上清中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）水平和细胞培养液上清中H2S浓度。采用双抗体夹心法测定细胞中总抗氧化力（total antioxidant capacity, T-AOC）的水平；采用流式细胞术检测细胞内的活性氧（reactive oxygen species, ROS）水平；采用分光光度法检测细胞内丙二醛（malonaldehyde, MDA）含量和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）的活性；采用ELISA法测定细胞中还原型谷胱甘肽（reduced glutathione hormon,GSH）的水平。采用实时定量PCR和Western Blot分别检测胱硫醚γ裂解酶（cystathionine gamma lyase, CSE）和胱硫醚β合成酶（cystathionine beta synthase,CBS）mRNA和蛋白的表达。【结果】（1）与对照组比较，高糖组HMrSV5细胞活力显著降低（P＜0.05），细胞培养液中LDH水平的显著增加（P＜0.05）。（2）与对照组比较，高糖（4.25%D-葡萄糖）显著降低了HMrSV5细胞培养液上清中H2S浓度（P＜0.05）；高糖显著下调了HMrSV5细胞中CSE mRNA和蛋白的表达（P＜0.05）。高糖处理虽然CBS mRNA和蛋白的表达有所降低，但是差异没有显著性（P＞0.05）。（3）与对照组比较，高糖组细胞内ROS水平和MDA含量显著增加（均P＜0.05），而细胞内T-AOC水平、SOD的活性和GSH水平显著降低（均P＜0.05）。（4）与高糖组比较，5×10-4、10-3和5×10-3mol/L的NaHS显著抑制了高糖诱导的HMrSV5细胞活力的降低和细胞培养液中LDH水平的增加（均P＜0.05）。（5）与高糖组比较，10-3mol/L的NaHS显著降低了细胞内ROS水平和MDA含量（均P＜0.05），显著增加了细胞内T-AOC水平、SOD的活性和GSH水平（均P＜0.05）。【结论】（1）高糖诱导了人腹膜间皮细胞损伤，其机制可能与高糖下调CSE的表达减少内源性H2S的产生和导致氧化应激有关。（2）外源性H2S抑制了高糖诱导的人腹膜间皮细胞损伤，其机制可能与外源性H2S抑制氧化应激有关。