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目的:胰腺癌是一种常见的消化道肿瘤,临床治疗效果不佳,5年生存率小于5%,这与胰腺癌快速的生长和极强的转移能力密切相关。近年来的研究发现,CXCL12-CXCR4趋化轴在调节肿瘤细胞增殖和转移方面起着重要的作用,其特异性阻滞剂AMD3100更是在肿瘤治疗方面越来越受到重视。已经有学者运用AMD3100在肺癌、胃癌、结肠癌方面取得突破,验证了AMD3100对多种类型的肿瘤细胞都有抑制增殖及转移的作用。但AMD3100在胰腺癌方面研究较少,本实验将对此展开探索,为AMD3100应用于胰腺癌方面提供基础。方法:首先进行胰腺癌细胞Panc-1的培养,根据以往文献及预实验,确定实验浓度。后分四个方面进行AMD3100对Panc-1细胞增殖性及侵袭性的影响:(1)细胞增殖:利用CCK-8检测不同浓度梯度的AMD3100干预对数生长期的Panc-1细胞24h及48h后的细胞增殖情况,在酶标仪上测出各组吸光度,间接代表各组细胞数,并计算各组抑制率。(2)细胞凋亡:利用Annexin V-FITC/PI双染法检测AMD3100影响Panc-1细胞24h的凋亡情况,并建立对照组,流式细胞仪进行检测并分类正常细胞、早期凋亡细胞、晚期凋亡及死亡细胞、细胞碎片,绘制散点图,比较对照组和实验组的早期凋亡细胞率和总凋亡细胞率。(3)细胞移行:利用划痕实验检测在AMD3100影响下培养Panc-1细胞24h,拍照对比在0h、12h和24h时Panc-1细胞向人工划痕移行的距离,并建立对照组,计算各组各时间点的移行率。利用Transwell小室移行系统验证在不同浓度梯度的AMD3100影响下,在16h内Panc-1细胞穿过上室内半透膜的数目,结晶紫染色后拍照并进行计数。(4)细胞侵袭:利用Transwell小室侵袭系统验证在不同浓度梯度的AMD3100影响下,在24h内Panc-1细胞透过上室内基质胶及上室半透膜的数目,结晶紫染色后拍照并进行计数。最后,从分子蛋白角度,利用western blot技术检验不同浓度梯度的AMD3100干预Panc-1细胞24h后对CXCL12、CXCR4、MMP-9、VEGF-C的表达水平,以此初步验证AMD3100对Panc-1细胞生物学行为的影响的机制。结果:1.细胞增殖:1、10、100μg/ml的AMD3100作用24h下的抑制率平均为13.45%、15.53%、25.97%;1、10、100μg/ml的AMD3100作用48h下的抑制率平均为16.55%、28.06%、47.43%。各组间P<0.05。说明AMD3100对Panc-1细胞增殖起着抑制性作用,且与AMD3100的浓度和作用时间成正比。2.细胞凋亡:对照组早期凋亡细胞平均为5.41%,AMD3100组早期凋亡细胞平均为19.31%,P<0.05;对照组总凋亡细胞平均为10.87%,AMD3100组平均为36.03%,P<0.05。说明通过AMD3100处理的Panc-1细胞,其凋亡细胞明显增加,AMD3100诱导了细胞凋亡。3.细胞移行:划痕实验中空白对照组12h、24h的移行率平均为45.27%和77.18%;AMD3100组12h和24h的移行率平均为19.09%和43.92%,相同时间点抑制率比较P<0.05。说明AMD3100可明显降低Panc-1细胞的移行能力。Transwell小室移行系统中0(对照组),1、10、100μg/ml的AMD3100作用Panc-1细胞24h的穿膜细胞数平均为361个、264个、238个、185个,各实验组P<0.05。说明AMD3100可明显抑制Panc-1细胞的移行能力,且随着AMD3100浓度的提高,穿膜细胞数减少,抑制效果增强。4.细胞侵袭:在Transwell小室侵袭系统中0(对照组),1、10、100μg/ml的AMD3100作用Panc-1细胞24h的穿膜细胞数平均为359个、265个、197个、122个,各实验组P<0.05。说明AMD3100可抑制Panc-1细胞的侵袭能力,且随着AMD3100浓度的增加,穿膜细胞数减少,抑制效果增强。5.在经western blot技术检测,AMD3100可显著降低Panc-1细胞中MMP-9和VEGF-C的表达水平,且随着AMD3100浓度的增高,抑制效果越显著;而CXCL2、CXCR4的表达并没有受到AMD3100的影响,AMD3100浓度增加,CXCL12和CXCR4表达如常。结论:AMD3100可能通过影响CXCL12与CXCR4的结合,下调MMP-9和VEGF-C的表达抑制Panc-1增殖、移行、侵袭的能力,诱导其细胞凋亡。