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目的制备载HIF-1αsi RNA阳离子卟啉微泡,联合超声开放肿瘤血管屏障并增加肿瘤细胞膜的通透性,增加肿瘤细胞内光敏剂的聚集及实现HIF-1αsi RNA的基因转染,构建肿瘤细胞水平的载体递送系统,实现基因治疗和光动力治疗的联合。方法使用乙醇注入法制备阳离子卟啉微泡,通过静电吸附法将HIF-1αsi RNA修饰于阳离子卟啉微泡(cationic porphyrin lipid microbubbles,Cp MBs)表面获得si HIF@Cp MBs。库尔特计数仪分析si HIF@Cp MBs的粒径,Zeta PALS电位分析仪检测si HIF@Cp MBs的电位及si HIF@Cp NPs的粒径,荧光显微镜下观察si HIF@Cp MBs形貌,TEM观察si HIF@Cp NPs形貌,紫外分光光度计和荧光分光光度计检测si HIF@Cp MBs的吸收及荧光,凝胶阻滞实验检测Cp MBs吸附HIF-1αsi RNA能力及合适的N/P比;共聚焦显微镜观察MDA-MB-231细胞吞噬FAM-si HIF@Cp MBs的情况,SOSG活性氧绿色荧光探针检测si HIF@Cp MBs在650±5nm的激光照射下产生1O2的能力,q RT-PCR法检测si HIF@Cp MBs沉默HIF-1α的能力,MTT法检测si HIF@Cp MBs对HUVEC和MDA-MB-231的细胞活力影响。采用皮下造模法,建立MDA-MB-231荷瘤BALB/c裸鼠模型。超声参数:3-12MHz,MI 0.104,同时尾静脉注射200ul浓度为1mg/ml的si HIF@Cp MBs悬液,二维灰度模式下及造影模式下观察si HIF@Cp MBs在肿瘤组织的成像情况;荷瘤BALB/c裸鼠随机分为3组(n=5),超声参数:脉冲频率1.03 MHz,占空比50%,超声强度1 W/cm2,间歇式超声发射30s/30s,持续时间3 min,同时尾静脉注射cy5.5-si HIF@Cp MBs,采用小动物活体荧光系统拍照比较;荷瘤BALB/c裸鼠随机分为5组(n=5),超声参数:脉冲频率1.03 MHz,占空比50%,超声强度1 W/cm2,间歇式超声发射30s/30s,持续时间3 min,同时尾静脉注射si HIF@Cp MBs或si N.C@Cp MBs,隔天记录老鼠肿瘤大小及体重;治疗20天后,取各组心、肝、脾、肺、肾,做H&E染色。结果si HIF@Cp MBs粒径主要集中在1.3μm,表面Zata电位为-10.57±1.74m V,镜下si HIF@Cp MBs呈大小约几微米的球形结构,分散性良好,FAM-si HIF成功吸附于Cp MBs上;经超声(脉冲频率1.03 MHz,占空比50%,超声强度1 W/cm2,间歇式超声发射30s/30s,持续时间1 min)局部爆破后,si HIF@Cp NPs粒径约为100nm,分散性良好;Cp MBs、si HIF@Cp MBs、si HIF@Cp MBs+US的吸收光谱和荧光光谱均未改变;N/P为15:1是,HIF-1αsi RNA全部吸附于Cp MBs表面。2.在超声局部爆破下,Prophyrin及FAM-si HIF成功转入细胞;只有si HIF@Cp MBs+US+Laser组产生大量的1O2;q RT-PCR检测HIF1αm RNA表达量,与其他组相比,si HIF@Cp MBs+US+Laser及si HIF@Cp MBs+US–Laser组,HIF1αm RNA量明显降低,存在统计学差异(P<0.05);MTT法检测细胞活性,与其他组相比,si HIF@Cp MBs+US+Laser组细胞存活率明显降低,数据存在统计学差异(P<0.05);3.si HIF@Cp MBs体内成像具有良好的超声造影效果;荧光半定量法分析Prophyrin在老鼠体内的富集,cy5.5-si HIF@Cp MBs+US组与cy5.5-si HIF@Cp MBs组相比,肿瘤处Prophyrin的富集明显增高,肝脏的富集有所下降,加超声处理组离体肿瘤组织和肝脏组织的荧光强度分别是131.9±17.14、58.54±5.59,不加超声处理组离体肿瘤组织和肝脏组织的荧光强度分别是5.56±1.75、129.97±13.98,存在统计学差异(P<0.05);4.荷瘤裸鼠注射200ul的1mg/ml浓度的si HIF@Cp MBs或si N.C@Cp MBs,si N.C@Cp MBs+US+Laser组老鼠肿瘤有复发,而si HIF@Cp MBs+US+Laser在观察期间未见复发,且相较其他治疗组,存在统计学差异(P<0.05);5.治疗20天,每组均未见重要脏器的损伤。结论1.si HIF@Cp MBs具有稳定的球形结构;2.si HIF@Cp MBs联合超声增加肿瘤血管屏障和细胞膜通透性,增加光敏剂/基因在肿瘤细胞内的富集;3.si HIF@Cp MBs通过将光动力治疗与基因治疗联合,增强了TNBC的治疗效果。