研究目的:A20蛋白作为一种泛素化编辑酶,同时也调节炎症级联放大效应的作用和下调由肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factorα,TNF-α)和其他细胞因子诱导的NF-κB信号通路的作用,它与很多肿瘤都有着高度相关性。然而,A20在不同的肿瘤中却发挥着不同的作用,这表现为抑制肿瘤或者促进肿瘤发展的双向作用。目前,关于A20在乳腺癌中的表达和其与p53在人乳腺癌MCF-7细胞株中的作用的研究未见报道,本研究着重探讨了以上问题。研究方法:1.通过免疫组织化学两步法检测具备完整生存资料的145例人乳腺癌组织及相对应的46例癌旁组织中A20蛋白的表达并分析A20的表达情况与患者临床病理特征及预后情况的关系。2.从本院手术室收集26例乳腺癌组织标本和14例乳腺良性肿瘤组织标本,运用qRT-PCR和Western blot的实验方法分别从mRNA和蛋白的水平上来研究A20在两组标本中的表达情况。3.首先细胞实验分组为:1)A20过表达载体组。2)A20空载体组。3)乳腺癌细胞空白对照组。4)Pifithrin-α(p53抑制剂)组。5)A20过表达载体+Pifithrin-α(p53抑制剂)组。6)A20空载体+Pifithrin-α(p53抑制剂)组。构建A20过表达质粒并转染MCF-7人乳腺癌细胞株之后,再运用CCK-8细胞增殖实验、细胞周期实验、细胞划痕实验和细胞侵袭实验来检测细胞的生物学行为,然后加入p53抑制剂检测在A20过表达后抑制p53对肿瘤细胞的影响。结果:1.A20蛋白主要表达于胞浆中,在35例乳腺癌组织及与之配对的35例癌旁组织中,癌组织中A20的表达率高于癌旁组织(71.4%VS 34.3%),A20蛋白的表达率存在显著性差异,*p<0.05。在145例乳腺癌组织中,高表达A20蛋白的有71例,低表达A20蛋白的有74例,高表达组的生存率为59.2%(42/71),而低表达组的生存率为81.1%(60/74),高表达组与低表达组的生存率之间存在显著性差异,*p<0.05。对与乳腺癌患者总生存率相关的因素进行单因素和多因素的分析显示A20的表达状态是一个独立的预后指标。2.实时荧光定量PCR和Western blot的实验结果显示:在mRNA和蛋白水平上,A20在人乳腺癌组织中的表达量均显著高于人乳腺良性肿瘤组织,*p<0.05。3.Pifi组和Pifi+NC组与Con组比较发现:Pifi+NC组和Pifi组细胞增殖能力高于Con组,且均具有统计学意义。A20、Pifi+A20各组与Con组比较,A20、Pifi+A20各组细胞增殖能力显著下降,且均具有统计学意义,*p<0.05。Pifi组和Pifi+NC组与Con组比较发现:Pifi组和Pifi+NC处于G1期的细胞数多于Con组;A20、Pifi+A20各组与Con组比较,A20组和Pifi+A20处于S期明显下降。NC组、Pifi组、Pifi+NC与Con组比较发现:细胞凋亡情况无明显差异。A20、Pifi+A20各组与Con组比较发现:A20过表达后细胞的凋亡率上升。与Con组相比,Pifi组和Pifi+NC组的细胞迁移明显更快,而A20组的细胞迁移明显下降。Pifi组与Con组比较发现:Pifi组细胞侵袭能力显著高于Con组,Pifi+NC组与NC组比较发现:Pifi+NC组细胞侵袭能力显著高于NC组,均具有统计学意义。A20、Pifi+A20组细胞侵袭能力均显著下降,且均具有统计学意义,*p<0.05。在mRNA和蛋白水平上,与Con组相比,Pifi组和Pifi+NC组A20和p53都表达下降,具有统计学意义。而A20组A20和p53都表达均表达上升,具有统计学意义,*p<0.05。结论:1.A20蛋白在乳腺癌组织芯片中的表达水平显著高于癌旁组织组织芯片,在乳腺癌组织中A20蛋白高表达组的生存率显著低于A20蛋白低表达组,并且A20的表达状态对于乳腺癌患者是一个独立的预后指标。2.在mRNA和蛋白水平,A20在人乳腺癌组织标本中的表达均显著高于人乳腺良性肿瘤组织标本。3.在A20过表达组中,A20和p53的mRNA和蛋白的表达量相比对照组都发生了显著的升高。同时,A20过表达会显著抑制人乳腺癌MCF-7细胞株的增殖、迁移和侵袭能力,并且增加该细胞的凋亡率,提示A20可能在乳腺癌中发挥抑癌的作用。