腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase, AMPIC)是细胞发育过程中的重要调控因子。FOXO3作为AMPK重要的下游分子,广泛参与细胞增殖、凋亡、分化、代谢等过程。然而,AMPK/FOXO3通路对鸭肌肉发育调控还未见相关研究,为了探讨腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK/FOXO3)信号通路在鸭成肌细胞凋亡与分化中的调控作用。首先,我们分别利用地塞米松和2%孕马血清诱导鸭成肌细胞凋亡和分化,检测AMPK和F0X03的表达量,然后,改变AMPK/FOXO3通路活性并检测细胞活性和周期以及相关标志基因表达量。1.分别用不同浓度的AMPK抑制剂(0.25μM、0.5μM、1μM、)和激活剂(0.5mM、1 mM、1.5 mM)处理成肌细胞,CCK-8和qRT-PCR结果显示0.5μM和1mM分别为抑制剂和激活剂的最佳处理浓度。鸭成肌细胞转染pEGFP-N1-FOXO3真核表达载体12、24、36、48h后检测FOX03的表达量,与对照组(Control和pEGFP-N1组)相比,在24小时鸭FOXO3的表达量显著上升。2.高浓度(1000ng/mL、10000ng/mL)地塞米松(DEX)显著性抑制鸭成肌细胞活性,促进AMPKal、FOXO3、Caspase 3、LC3和Caspase 7 mRNA表达量,然而AMPKa2仅在10000ng/mL表达量显著性升高,另外,流式细胞结果显示1000ng/mL组GOG1期细胞数明显增加,进一步检测p-AMPK和FOXO3的蛋白表达量也有明显的增加。添加0.5μM Dorsomorphin 2HC1 (AMPK抑制剂)后,DEX对G2M期细胞的抑制被减弱,同时Caspase3、Caspase 7和LC3的表达量增加也被减弱。可初步推断高浓度DEX对细胞凋亡起促进作用。3.分别用1mM AICAR (AMPK抑制剂)和真核表达载体pEGFP-N1-FOXO3激活AMPK/FOXO3通路,GOG1期细胞明显增加,Caspase3和LC3的表达量显著升高。然而,Caspase 7和Beclinl表达量变化没有显著性差异,Fas表达量仅在AICAR组有显著性升高。4.利用2%孕马血清诱导(24,48,72h)成肌细胞分化,MRF4仅在诱导分化48后mRAN表达量显著性高于对照组而MyHCAMPK和FOXO3在诱导分化48、72h后表达量均显著升高,因此48h为诱导分化最佳时间点。添加0.5μMDorsomorphin 2HC1 (AMPK抑制剂)后,2%组的MyHC mRAN表达量显著性高于对照组和2%+DOR组。1mM AICAR (AMPK抑制剂)和真核表达载体pEGFP-N1-FOXO3激活AMPK/FOXO3通路,MyHC的表达量也发生了显著性升高。