【摘 要】
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猪囊虫病是一种重要的人畜共患寄生病，在拉美、非洲及亚洲有广泛分布，在我国主要分布于西北和西南地区。该病的流行不仅给人类健康带来很大危害，而且还可造成巨大的经济损失。虽
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猪囊虫病是一种重要的人畜共患寄生病，在拉美、非洲及亚洲有广泛分布，在我国主要分布于西北和西南地区。该病的流行不仅给人类健康带来很大危害，而且还可造成巨大的经济损失。虽然近年来该病的流行呈现一定的下降趋势，但远未被控制。囊虫疫苗的研制和应用是预防该病流行的重要手段之一。
AnnexinB2、B3是我们以免疫筛选法从猪囊尾蚴cDNA文库分离得到的新基因。将其核酸序列进行同源比较和分析，发现它是annexin家族新的一员。研究annexin B2、B3不仅可以了解猪囊尾蚴寄生、移行、生长、发育等生命活动，也为预防和治疗该类疾病提供新的药物靶点，而且可以为整个annexin家族的研究提供有意义的遗传及分子进化资料。本研究在前人研究基础上，通过PT-PCR方法扩增得到AnnexinB2基因和 AnnexinB3基因，构建了真核表达载体pcDNA3.1/B2和pcDNA3.1/B3，并将其免疫BalB/C小鼠，初步探讨了其免疫原性，为下一步AnnexinB2和AnnexinB3核酸疫苗的制备和应用奠定了基础。试验结果如下：
1、参照Geneback中发表的AnnexinB2和AnnexinB3基因序列，设计合成了两对特异性引物，用PCR法分别扩增AnnexinB2和AnnexinB3两个基因片段，将PCR产物纯化后与真核表达载体pcDNA3.1 连接，经抗生素筛选、双酶切及测序鉴定，结果显示真核表达质粒pcDNA3.1/B2和pcDNA3.1/B3构建成功。用电穿孔法转染HeLa细胞，结果表明AnnexinB2和AnnexinB3能在HeLa细胞中初步表达。
2、将构建成功的重组质粒pcDNA3.1/132和pcDNA3.1/B3，分别免疫BalB/C小鼠，利用间接ELISA方法分别检测免疫小鼠的血清抗体水平，利用淋巴细胞细胞因子诱生试验检测免疫小鼠淋巴细胞的IFN-γ和IL-4的表达水平。结果表明：两种质粒单独接种时诱导较高特异性抗体水平，IFN-γ和IL-4的表达水平也有显著的提高。动物试验显示pcDNA3.1/B2和pcDNA3.1/B3核酸疫苗能诱导机体产生一定的免疫应答。
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