目的:EBV(Epstein-Barr virus,EBV)感染与胸腺瘤及胸腺相关自身免疫性疾病的关系日益成为研究的热点,目前关于二者相关性的研究结果存在一定的差异,相互作用机制也尚不明确。EBV相关疾病患者血中存在游离的EBV DNA,本实验旨在定量检测胸腺瘤及胸腺相关疾病患者血液中游离EBV DNA,探索EBV DNA拷贝数与胸腺瘤及胸腺相关疾病的关系,以及EBV DNA拷贝数与胸腺瘤分型、分期之间的关联,为进一步用于指导治疗、判断疗效及预后提供理论支持。同时,构建包含EBV DNA的质粒以期为后续分子机制研究提供支持。方法:本实验利用实时定量荧光PCR(Quantitative Real-time PCR,q PCR)技术建立EBV DNA定量检测方法,检测胸腺瘤及胸腺相关疾病患者血中EBV DNA拷贝数。通过对实验样本的不同分组,研究胸腺瘤、重症肌无力患者血中EBV DNA拷贝数与正常对照组之间的差异,探究EBV感染与胸腺瘤及重症肌无力发病的相关性。此外,本实验利用流式细胞术检测胸腺瘤及胸腺相关疾病患者EBV DNA拷贝数与血液中各淋巴细胞亚型之间的联系。构建包含EBV感染患者EBV DNA的质粒,以及包含EBV DNA标准序列的质粒,为进一步研究EBV DNA在EBV相关疾病中的作用机制提供帮助。结果:利用实时定量荧光PCR技术定量检测36例实验样本,其中包括胸腺瘤患者血液样本23例,重症肌无力患者血液样本15例。发现胸腺瘤患者血液中EBV DNA Bam HI-W拷贝数与正常对照组存在差异,且明显高于正常对照组,提示EBV的活跃状态与胸腺瘤的发生相关。对比重症肌无力患者与正常对照组血中EBV DNA Bam HI-W拷贝数,发现重症肌无力组具有较高的Bam HI-W拷贝数,但二者之间差异不明显,EBV感染在重症肌无力的发生中的作用机制仍需进一步探索。分析发现胸腺瘤WHO病理分型和Masaoka-Koga分期各亚组之间EBV DNA拷贝数差异不明显。此外,流式细胞术结果显示,随着EBV DNA拷贝数的增加,B细胞表面分子CD19和CD20表达上调。未得到EBV DNA拷贝数与Th17或Treg细胞比例变化之间的明显相关性,但是患者血中Th17/Treg比值随着患者血液样本中Bam HI-W拷贝数的增多而增大,具有显著相关性。同时,本实验成功构建出含有标准EBV Bam HI-W基因,以及包含感染EBV胸腺瘤患者的Bam HI-W基因的质粒,为后续研究EBV感染在胸腺瘤及重症肌无力发病过程中的作用机制奠定了基础。结论:本实验利用实时定量荧光PCR技术成功建立定量检测胸腺瘤及胸腺相关自身免疫性疾病患者血液中EBV DNA拷贝数的方法,并检测临床血液样本,具有较好的重复性和准确性。这一方法为监测胸腺瘤及胸腺相关自身免疫性疾病患者治疗过程中EBV DNA拷贝数奠定了基础,有利于辅助临床的抗病毒治疗的实施,并为胸腺瘤及重症肌无力患者抗病毒治疗预后提供参考。EBV感染后,随着EBV活跃状态改变,患者体内淋巴细胞表面膜分子表达存在一定的变化趋势,为后续研究EBV感染与胸腺瘤和胸腺相关自身免疫性疾病的发生机制提供帮助。