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食欲肽(Orexin)是一个能够在大脑不同区域高效表达的重要神经肽,而且是一个能调节能量动态平衡的重要信号分子,食欲肽是通过相应受体即食欲肽受体(OX1R和OX2R)发挥作用的,其被发现与动物的摄食、体重、醒觉循环、能量平衡、神经功能、心血管功能调节和疼痛有关。信号分子与细胞表面的食欲肽受体2结合,即可以通过Gq蛋白介导,激活磷脂酶Cβ (PLCp),以三磷酸肌醇(IP3)为第二信使的信号通路,又能够通过Gs或Gi蛋白介导,激活腺苷酸环化酶(AC),以环磷酸腺苷(cAMP)为第二信使的信号通路。为了揭示OX2R在猪的生长及能量调控中所起的作用,本研究通过对猪OX2R基因进行分子克隆以及真核表达载体的构建,获得pcDNA3.1(+)-myc/pOX2R重组质粒后,与3×PGL4.29[luc2p/CRE/Hygro]质粒共转染HEK293T细胞,用不同配体作用于细胞后,然后用微孔板检测仪检测荧光素酶的表达量。主要研究结果如下：1、采用RT-PCR技术从猪的下丘脑中扩增到大小为1332bp的OX2R目的基因。将猪OX2R基因片段连接到pcDNA3.1(+)真核表达载体并获重组质粒pcDNA3.1(+)-myc/pOX2R.2、将pcDNA3.1(+)-myc/pOX2R质粒以脂质体法转染HEK293T细胞,用Western blot检测OX2R在HEK293T细胞的表达,结果显示猪OX2R蛋白成功表达。3、将pcDNA3.1(+)-myc/pOX2R质粒和PGL4.29[luc2p/CRE/Hygro]报告基因质粒按1：5的比例共转染HEK293T细胞。10-4M(高)、10-7M(中)和10-10M(低)三个不同浓度的TCS分别与一系列不同浓度的激动剂食欲肽A或食欲肽B作用于共同表达OX2R和荧光素酶的HEK293T细胞,通过检测荧光素酶的表达数量,间接评估各配体与受体结合后对细胞内cAMP信号通路的影响。结果发现,配体在一定浓度的范围内,细胞内cAMP水平与各配体的浓度呈良好的剂量效应关系。