【摘 要】
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目的:本研究旨在通过探讨miR-29a对巩膜成纤维细胞中PTEN、MMP-2（Matrixmetallo Proteinase-2）和Ⅰ型胶原表达的调控作用,研究巩膜重塑中的作用因子,以期为进一步探究近视发病机制奠定基础。方法:我们使用由si RNA和Lipofectamine 2000转染剂合成的转染复合物在特定条件下对巩膜成纤维细胞进行转染。分别用CCK-8和流式细胞术检测miR-29a对巩膜
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目的:本研究旨在通过探讨miR-29a对巩膜成纤维细胞中PTEN、MMP-2（Matrixmetallo Proteinase-2）和Ⅰ型胶原表达的调控作用,研究巩膜重塑中的作用因子,以期为进一步探究近视发病机制奠定基础。方法:我们使用由si RNA和Lipofectamine 2000转染剂合成的转染复合物在特定条件下对巩膜成纤维细胞进行转染。分别用CCK-8和流式细胞术检测miR-29a对巩膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响。通过q PCR技术检测miR-29a是否能调控巩膜成纤维细胞中PTEN、MMP-2和Ⅰ型胶原在m RNA水平的表达。使用WB技术检测miR-29a能否调控巩膜成纤维细胞中PTEN、MMP-2和Ⅰ型胶原在蛋白水平的表达。结果:CCK-8检测结果表明,在转染0、24、48和72小时后,mimic组的相对OD值分别为0.233±0.005、0.380±0.008、0.650±0.040、0.906±0.032,inhibitor组的相对OD值分别为0.272±0.011、0.393±0.029、0.597±0.059、0.950±0.101。流式细胞术结果显示转染后48小时各组细胞凋亡率分别为:mimic组（0.043±0.007）、NC组（0.040±0.006）、inhibitor组（0.032±0.003）、inhibitor NC组（0.027±0.010）、lipofectamine组（0.027±0.005）和blank组（0.031±0.009）。q PCR结果显示,与空白组相比,激动剂组中的PTEN（0.795±0.182,P=0.2783）、MMP-2（0.621±0.105,P=0.0033）和COL1A1（0.271±0.100,P=0.0002）均下降,而抑制组中的PTEN（1.211±0.100,P=0.2614）、MMP-2（1.161±0.053,P=0.1190）和COL1A1（1.704±0.093,P=0.0003）均升高。WB检测结果表明,相比较空白组,激动剂组中的PTEN（0.392±0.039,P＜0.0001）,MMP-2（0.577±0.017,P＜0.0001）和COL1A1（0.072±0.006,P＜0.0001）的表达降低,而抑制剂组中的PTEN（1.043±0.042,P=0.9413）,MMP-2（1.397±0.075,P=0.0002）和COL1A1（1.935±0.081,P＜0.0001）的表达增加。结论:miR-29a能够在一定程度上抑制巩膜成纤维细胞中PTEN、MMP-2和Ⅰ型胶原的表达,这或许可以为巩膜重塑的深入研究提供理论依据。
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