Ghrelin对大鼠味觉厌恶记忆形成的影响及其机制研究

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目的:观察外侧杏仁核微量注射ghrelin对大鼠味觉厌恶记忆形成的影响。方法:应用细胞外电生理记录了解ghrelin对外侧杏仁核神经元放电的影响。(1)将大鼠分成4组,分别注射3nM、15nM、30nM ghrelin及生理盐水。(2)将不同浓度的D-Lys3-GHRP-6(1nM, lOnM and250nM)注射到10只大鼠杏仁核;应用行为学方法了解ghrelin对大鼠味觉厌恶记忆形成的影响。(1)将大鼠分成2组,每组20只,分别在训练前一组外侧杏仁核局部注射ghrelin(每侧12ng,0.75ul),一组局部注射生理盐水。(2)将大鼠分成2组每组16只。一组注射ghrelin前20分钟注射纯化的抗GHS-Rla IgG(每侧0.5mg/ml,0.75ul)一组注射生理盐水作为对照。(3)将大鼠分成两组(n=5),一组在注射ghrelin前注射PI3Kinase抑制剂LY294002,另一组注射生理盐水作为对照。结果:(1)经外侧杏仁核注射微量ghrelin (5uM,0.5-0.75ul)可以阻断大鼠味觉厌恶(conditional taste aversion, CTA)记忆的形成(p<0.05),但对记忆的提取无影响。(2)外侧杏仁核注射微量ghrelin (5uM,0.5-0.75ul)不影响大鼠CTA训练及记忆测试时液体的摄入量,也不影响大鼠的感觉传导(p>0.05)。(3) GHSRla抗体或GHSR1a受体拮抗剂YIL718预处理可以完全反转ghrelin对CTA形成的阻断作用(4h p<0.05;24h p<0.05),说明ghrelin对CTA的影响是由GHSRla介导的。(4) PI3Kinase抑制剂LY294002预处理可以完全反转ghrelin对CTA形成的阻断作用(p<0.05)。(5)多管微电极细胞外电生理记录表明ghrelin浓度依赖性地增加外侧杏仁核神经元的自发放电(p<0.05)。GHSR1a受体拮抗剂D-Lys3-GHRP-6(250nM)可阻断ghrelin对杏仁核神经元自发放电的影响。(6) D-Lys3-GHRP-6本身浓度依赖性地抑制外侧杏仁核神经元的自发放(p<0.01)。结论:经外侧杏仁核注射微量ghrelin特异性阻断大鼠CTA记忆的形成,但不影响记忆的提取。GHSRla受体介导的PI3Kinase及下游信号传递通路的激活是Ghrelin发挥CTA阻断作用的分子机制之一,而调节细胞兴奋性则可能是Ghrelin阻断CTA形成的重要的细胞机制之一。本研究可能对ghrelin治疗伴有认知障碍的患者提供一些理论依据。
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