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婴幼儿配方乳粉作为一种母乳替代品,是非母乳喂养婴幼儿的首选食物。婴幼儿配方乳粉的研制,从宏量营养素到微量营养素都尽可能的接近人乳。目前配方乳粉在营养成分上已满足婴幼儿的生长需要,但其中缺少能够提高婴幼儿免疫能力的免疫活性物质。人乳铁蛋白(human lactoferrin,LFH)作为人乳中主要的免疫活性成分蛋白质之一,占普通母乳总蛋白含量的10%,是婴幼儿增强免疫系统能力的重要物质,是婴幼儿配方奶粉“母乳化”的重要参数。乳铁蛋白(lactoferrin,LF)在经胃蛋白酶作用下会释放生物活性部位乳铁蛋白素(lactoferricin,Lfcin)。研究表明,LF与Lfcin在抵抗真菌、炎症以及病菌感染,抗癌及提高机体的免疫调节能力促进伤口愈合等方面具有显著作用。现阶段包括我国在内的许多国家均已将LF加到婴幼儿配方奶粉中,但用量不明确,且LFH来源受限,价格昂贵,限制了其的添加使用。牛乳铁蛋白(bovine lactoferrin,LFB)分子量与LFH分子量相近,且LFH与LFB顺序同源性高达69%,LFB原料来源便捷、价廉,尤其是小肽Lfcin B的生产更节约成本。如何以低价等效成分替代母乳活性成分,降低婴幼儿配方奶粉中免疫活性物质的成本具有重要的意义。本研究以牛乳清乳铁蛋白(bovine whey lactoferrin,LFW)、牛初乳乳铁蛋白(bovine colostrum lactoferrin,LFC)与LFH及Lfcin B与Lfcin H为原料,采用CCK-8试剂测定不同来源的LF与Lfcin分别作用小鼠脾淋巴细胞24 h、48 h、72 h后的细胞存活率,及其在丝裂原刺激下T、B淋巴细胞增殖作用的影响,并采用ELISA法测定其对细胞分泌细胞因子IL-2、IL-4、IL-10及TNF-?的影响。探究其作用的最佳剂量及相互替代的用量比例关系,并以63℃/30 min、72℃/15 min、72℃/15 s、85℃/15 min、85℃/15 s、95℃/10 min、模拟消化处理LF,探讨不同处理条件对LF作用效果的影响情况,为湿法处理LF及为LFB替代LFH在配方奶粉中的添加提供科学理论依据。试验结果表明:(1)对于未处理的两种牛乳铁蛋白可替代LFH应用于婴幼儿配方产品中以提高婴幼儿免疫能力,LF作用浓度在0.50-2.00 mg/m L范围内,Lfcin作用浓度为75-125μg/m L。(2)不同温度处理及消化处理可以改变LF的作用效果,处理后的LFW、LFC及LFH均可在一定浓度范围内对淋巴细胞及在Con A与LPS刺激下的淋巴细胞的增殖均有促进作用,并能提高细胞分泌细胞因子IL-2、IL-4、IL-10及TNF-?。(3)各处理条件下中以95℃加热10 min的处理条件使得LF的促进效果最佳,63℃加热30 min、85℃加热10 min的处理条件相对较优。且处理后的两种LFB均可达到LFH的作用效果。综上所述,本试验以体外LF与Lfcin培养淋巴细胞,研究其在促进增殖及分泌免疫相关因子方面的差异性,证实加热处理LFB均能促进免疫细胞的分裂增殖及相关免疫因子的增加,且LFW及LFC能与LFH达到同等的功效,只是在作用浓度上有所差异。本研究为两种来源的LFB替代LFH,以及Lfcin替代LF应用于婴幼儿配方奶粉的研制,以提高婴幼儿免疫力提供了试验基础,并为LF的湿法混合提高了试验依据,也为来源于牛乳的LF及Lfcin替代来源于人乳的LF及Lfcin提供支持。