三叶青黄酮通过COX-2/PGE2通路干预荷Lewis肺癌小鼠M2型巨噬细胞及相关因子表达的研究

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目的 本实验通过从中药三叶青中提取三叶青黄酮成分,研究三叶青黄酮对荷Lewis肺癌小鼠的一般生存状况、瘤重、抑瘤率等方面影响,以及探究三叶青黄酮是否通过COX-2/PGE2通路,对M2型巨噬细胞及TGF-β1、IL-10免疫抑制细胞因子产生影响,从而降低免疫抑制的可能机制。方法①药物制备,提取三叶青黄酮,制备成粉末,并将其配成100mg/ml、50mg/ml、25mg/ml三种不同浓度,设为高、中、低剂量组。②建立小鼠肺癌模型,随机分为6个组,分别为三叶青黄酮高、中、低剂量组、塞来昔布组、生理盐水组及未造模组。③造模24小时后根据分组开始灌胃,灌胃周期14天,观察各组小鼠生存状态、体重、肿瘤生长情况;灌胃14天后处死小鼠,剥取瘤组织,计算抑瘤率;ELISA测定小鼠外周血中COX-2、PGE2、IL-10、TGF-β1表达;流式细胞术检测小鼠脾细胞中M2型巨噬细胞的表达;Western blot检测肿瘤组织内COX-2、IL-10、TGF-β1的蛋白表达量。④数据统计。结果①一般生存状况:造模组相对于未造模组小鼠反应迟缓,进食减少,消瘦,瘤块皮肤有掉毛及破损等情况。②抑瘤率:三叶青黄酮高剂量组抑瘤率为46.6%,塞来昔布组抑瘤率为41.4%,三叶青黄酮中剂量组抑瘤率为22.0%,三叶青黄酮低剂量组抑瘤率为16.1%。③小鼠外周血中COX-2、PGE2、IL-10、TGF-β1含量:由高到低依次为:生理盐水组、三叶青黄酮低剂量组、三叶青黄酮中剂量组、塞来昔布组、三叶青黄酮高剂量组、未造模组。其中,实验各组小鼠外周血中COX-2含量比较,只有生理盐水组与三叶青黄酮低剂量组间、塞来昔布组与三叶青黄酮中剂量组间无统计学差异(P>0.05),其余各组间均有统计学差异(P<0.05)。实验各组小鼠外周血中PGE2含量比较,两两组间均有统计学意义(P<0.05)。实验各组小鼠外周血中IL-10含量比较:未造模组与高剂量组、生理盐水组与低剂量组、塞来昔布与中剂量组无统计意义(P>0.05),其余均有统计学意义(P<0.05)。实验各组小鼠外周血中TGF-β1含量比较:塞来昔布组与中剂量组无统计学意义(P>0.05),其余各组均有统计学差异(P<0.05)。④肿瘤组织中COX-2、IL-10、TGF-β1蛋白表达:肿瘤组织中COX-2蛋白表达量比较:只有低剂量组与中剂量间无统计学意义(P>0.05),其余均有统计学意义(P<0.05)。肿瘤组织中TGF-β1蛋白表达量比较:生理盐水组与三叶青黄酮低剂量组无统计学意义(P>0.05),塞来昔布组与三叶青黄酮高剂量组无统计学意义(P>0.05),三叶青黄酮低剂量组与中剂量组无统计学意义(P>0.05),与其余各组有统计学意义(P<0.05)。肿瘤组织中IL-10蛋白表达量比较:生理盐水组与塞来昔布组及三叶青黄酮低剂量组均无统计学意义(P>0.05),塞来昔布组与三叶青黄酮各剂量组均无明显差异,无统计学意义(P>0.05),三叶青黄酮中剂量组与高剂量组无统计学意义(P>0.05),其余各组有统计学意义(P<0.05)。⑤脾细胞中M2型巨噬细胞的表达:塞来昔布组与三叶青黄酮高剂量组间无明显差异,无统计学意义(P>0.05),其余各组均有统计学意义(P<0.05)。结论①三叶青黄酮具有抑瘤作用,且高剂量组抑瘤效果最佳。②三叶青黄酮可降低荷瘤小鼠外周血及肿瘤组织中COX-2、PGE2、IL-10、TGF-β1含量。③三叶青黄酮具有通过COX-2/PGE2通路下调M2型巨噬细胞表达的作用,高剂量组与塞来昔布组作用相似。
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