长链非编码RNA ENO1-AS1通过结合YB1调控ENO1表达对肝癌细胞增殖的影响

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目的:本文主要探讨了肝癌组织及肝癌细胞系中高表达的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)ENO1-AS1在肝癌中的生物学效应以及潜在调控机制,为开发和探寻肝癌诊断治疗靶点提供基础实验依据。方法:经生物信息学分析筛选出肝细胞肝癌组织中高表达的lncRNA ENO1-AS1,并通过PCR检测ENO1-AS1在细胞系中的表达。敲低或过表达肝癌细胞内ENO1-AS1后,通过PCR以及WB检测ENO1的表达改变,并通过MTT,平板克隆以及Ed U实验观察细胞增殖改变。RNA免疫共沉淀以及RNA下拉实验用于检测YB1和ENO1-AS1的结合,染色质免疫共沉淀实验用于检测转录因子YB1与ENO1启动子序列的结合。转染YB1小干扰RNA或者过表达质粒后,通过PCR以及WB检测ENO1的表达改变。敲低或过表达ENO1后,以及在敲低ENO1-AS1的细胞中过表达ENO1进行回复性实验后,通过PCR以及WB检测ENO1的表达改变并通过MTT,平板克隆以及Ed U实验观察细胞增殖改变。使用Co Cl2或酸性培养基模拟低氧以及酸性条件培养肝癌细胞,并通过PCR检测处理后细胞中ENO1-AS1的表达改变。结果:ENO1-AS1促进ENO1的表达以及肝癌细胞的增殖。ENO1-AS1通过结合YB1调控其与ENO1启动子的结合。敲低ENO1-AS1引起的细胞增殖受抑可以在过表达ENO1后被回复。低氧处理后,肝癌细胞中ENO1-AS1表达上调。结论:肝癌中高表达的ENO1-AS1可以促进YB1与ENO1启动子的结合,通过在转录水平上调ENO1的表达促进肝癌细胞增殖,而ENO1-AS1在肝癌中的高表达可能受低氧微环境影响。
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