根瘤内生放线菌的系统分类研究

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本实验采用根瘤匀浆法和根瘤切片法利用S培养基、BAP培养基、JA培养基和ISP4培养基分别从木槿、桤木及沙棘根瘤内成功分离出32株放线菌。分离结果表明,成分相对复杂的s培养基分离效果较好。从河北省微生物多样性研究与应用重点实验室菌种库中纯化出16株根瘤内生放线菌。采用形态学、16S rDNA序列及G+C mol%的测定等分类技术,对分离和纯化得到的48株根瘤内生放线菌进行分类,初步将48株菌株归为不同的属。通过对供试菌株形态分析发现,菌株49481等8株菌株基丝丰富多分枝,气丝形成长孢子链;菌株49514、49515基内菌丝丰富,气生菌丝较短,断裂成短孢子链;菌株49441、49432基丝丰富,可形成较长的孢子链;菌株49484等24株菌株上着生有单个孢子,可形成大量的单孢子;菌株W14-3基丝可呈“Z”型断裂,菌丝顶端或中间有膨大;菌株2132、2237形成粗细不均的菌丝,菌丝有膨大的结构。菌株49488等8株供试菌株有可溶性色素产生。颜色主要为黄色和棕色。生理生化实验结果表明,所有供试菌株均能利用树胶醛糖和葡萄糖作为唯一碳源生长。除菌株49504等5株菌株外,均能利用甘露糖作为唯一碳源生长;49482等5株菌株能在含有10% NaCl的培养基上生长;所有菌株均不能使明胶液化,也不能使纤维素水解;部分菌株能使硝酸盐还原、水解淀粉;所有菌株均能利用七叶苷;菌株49489等12株菌株能利用苹果酸钙,菌株49504、49514、49515能利用柠檬酸钠,菌株49505、2132能利用乙酸钠,所有菌株均不能利用草酸钠。G+C mol%的测定结果表明,供试菌的G+C mol%在55.52%~76.13%之间,属于高G+C mol%的范围。通过对供试菌株进行16S rDNA序列系统发育分析可知,48株供试菌株划分为8个属:菌株49483等属于小单孢菌属(Micromonospora)、菌株49481等属于野野村菌属(Nonomuraea)、菌株49514等属于马杜拉放线菌属(Actinomadura)、菌株49441等属于链霉菌属(Streptomyces)、菌株49460属于拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis)、菌株W14-3属于假诺卡氏菌属(Pseudonocardia)、菌株49449属于糖霉菌属(Glycomyces)、菌株2132等属于三角放线菌属(Trigonala)。
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