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目的:研究花旗松素对乳腺癌细胞的增殖和侵袭转移的影响,并探讨侵袭转移与上皮间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)之间的关系以及分子机制。方法:1.花旗松素对乳腺癌细胞增殖和侵袭转移的影响:采用不同浓度(10μM,30μM,100μM)的花旗松素干预高度侵袭转移的人源性乳腺癌细胞株MDA-MB-231和Balb/c鼠源性乳腺癌细胞株4T1。结晶紫实验和集落实验检测乳腺癌细胞的增殖能力,并用免疫细胞化学(Immunocytochemistry,ICC)检测细胞中Ki67的表达。划痕和Transwell实验分别检测乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力。2.花旗松素对乳腺癌细胞侵袭转移的作用机制:花旗松素干预乳腺癌细胞株MDA-MB-231和4T1后,ICC检测Vimentin和F-actin的表达。免疫蛋白印迹法(Western Blot,WB)和实时定量逆转录-聚合酶链反应(Quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)分别检测上皮表型分子E-cadherin、Claudin,间质表型分子Vimentin、N-cadherin,转录因子Slug、Snail以及上游信号分子β-catenin的蛋白和mRNA的表达。进一步转染腺病毒β-catenin,划痕和Transwell实验检测乳腺癌细胞的侵袭转移能力,WB实验分别检测E-cadherin、Claudin、Vimentin、N-cadherin、Slug、Snail以及β-catenin的蛋白表达。3.花旗松素对小鼠原位肿瘤增殖和肺转移的影响:6-8周雌性Balb/c小鼠随机分为模型组、花旗松素干预组。所有小鼠均皮下接种4T1细胞(1×106/只)。待原位肿瘤长至1cm3后,干预组花旗松素(100mg/kg)四天一次灌胃,模型组不给于任何处理。28天后,处死小鼠。原位瘤组织:测量重量,免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)检测Ki67和β-catenin的表达,免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测Vimentin和Slug的表达。肺组织:转移结节计数和HE染色。结果:1.花旗松素抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231和4T1的增殖、侵袭和转移并呈现一定的剂量依赖性。2.花旗松素下调乳腺癌细胞中Vimentin的表达和改变肌动蛋白F-actin的分布。花旗松素剂量依赖性的上调了乳腺癌细胞中E-cadherin、Claudin的蛋白和mRNA表达,下调了Vimentin、N-cadherin、Slug、Snail和β-catenin的蛋白和mRNA表达。过表达β-catenin后,花旗松素对乳腺癌迁移和侵袭的抑制作用减弱;E-cadherin、Claudin的蛋白表达减少;Vimentin、N-cadherin、Slug、Snail和β-catenin的蛋白表达增多。3.花旗松素抑制小鼠原位瘤的增殖及Ki67的表达。原位瘤组织中,Vimentin、Slug及β-catenin的表达量均减少。肺组织中,转移结节的数量减少,转移灶面积减小。结论:花旗松素可抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭及转移。这种抑制作用可能与β-catenin表达的下调,引起EMT相关分子表达的改变有关。