论文部分内容阅读
目的:piRNA(Piwi-interacting RNA)是一种特异性表达的内源性小分子非编码RNA,主要表达于生殖细胞中,通常与PIWI蛋白结合而发挥生物学作用。近年来在越来越多的肿瘤细胞中发现piRNA有异常表达,而胃癌中piRNA的表达情况及其与PIWI蛋白相关性的报道则比较少,本研究旨在筛选出在胃癌(Gastric Cancer,GC)组织及癌旁组织中差异性表达的piRNA,分析其表达特点及其与胃癌患者临床病理特征的关系,探寻piRNA与PIWIL4(Piwi-Like4)表达的相关性及其在胃癌患者预后中的作用,揭示其在胃癌临床诊治过程中的潜在价值。方法:1.收集2014年~2015年福建省某三甲医院进行外科手术的50例胃癌患者的胃癌组织和癌旁组织,并对患者预后进行随访。2.提取新鲜胃癌及癌旁组织中总RNA,利用人piRNA芯片(Human piRNA chip)筛选出差异性差异性表达的piRNAs。3.应用即时荧光定量PCR(Real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)的方法检测相关piRNA在胃癌及癌旁组织中的差异性表达,并分析其与肿瘤大小,部位,分型,浸润深度,TNM分期,神经血管侵犯和淋巴结转移等临床病理特征的相关性。4.选取对应胃癌及癌旁组织制作石蜡组织芯片(Tissue Miroarray,TMA),利用免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)的方法分别检测PIWIL4在胃癌、癌旁中的表达情况。5.结合胃癌患者随访信息,分析piRNA及PIWIL4与患者术后总体生存率(Overall survival,OS)的相关系,探寻piRNA及PIWIL4在胃癌患者预后中的作用。结果:1.通过人piRNA芯片共鉴定出了50个在胃癌、癌旁组织中有差异性表达的piRNAs,其中17个在胃癌组织中高表达,33个低表达,进一步通过预实验筛选出2个与胃癌密切相关的piRNAs,即piR-hsa-9994与piR-hsa-30715。2.piR-9994与piR-30715在胃癌组织中的表达量均显著高于癌旁组织(均P<0.01)。3.当胃癌侵袭深度为T3和T4时,piR-9994的表达水平显著高于T1和T2(P=0.023),是前者的4倍;按TNM分期,Ⅲ、Ⅳ期的表达量显著高于Ⅰ、Ⅱ期胃癌(P=0.001),上升4.6倍;淋巴结转移组的表达量是未转移组3倍(P=0.045)。4.当胃癌浸润深度为T3和T4时,piR-30715的表达量显著高于T1和T2(P=0.034),上升4.4倍;按TNM分期,Ⅲ、Ⅳ期的表达量显著高于Ⅰ、Ⅱ期胃癌(P<0.001),提升6.2倍;淋巴结转移组的表达量是未转移组5.1倍(P=0.017)。5.PIWIL4在胃癌组织中的表达率为46%(23/50),显著高于癌旁组织中的14%(7/50),两者差异有统计学意义(χ2=12.190,P<0.001)。6.胃癌组织中piR-9994表达与PIWIL4表达呈正相关(r=0.318,P=0.024);胃癌中piR-30715的表达和PIWIL4的表达呈正相关(r=0.333,P=0.018)。7.piR-3071高表达组总体生存率(OS)比低表达组差(P=0.024),PIWIL4阳性表达组总体生存率比阴性组差(P=0.025);PIWIL4是胃癌预后独立的不良因素。结论:1.piR-9994在胃癌组织中过表达并与肿瘤浸润深度、TNM分期、淋巴结转移密切相关,piR-9994可能通过调节PIWIL4表达来参与胃癌的发生、发展,piR-9994可能成为诊断胃癌和确定胃癌恶性程度的分子标记物。2.piR-30715在胃癌组织中过表达并与肿瘤浸润深度、TNM分期、淋巴结转移及胃癌患者预后密切相关,piR-9994可能通过调节PIWIL4表达来参与胃癌的发生、发展与转移,piR-30715可能成为诊断胃癌、确定胃癌恶性程度及预后判断的分子标记物。