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目的:
本研究使用ApoE-/-小鼠作为模式动物建立动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)模型,应用骐龙血脉健方干预其致病过程。通过观察用药对小鼠体重、血脂、腹主动脉收缩及舒张功能的影响,及对其血清氧化低密度脂蛋白(Oxidized low-density lipoprotein,Ox-LDL)、主动脉蛋白CD36、血小板反应蛋白-1(Thrombospondin-1, TSP-1)的表达和血小板活化的相关指标的检测,以探究骐龙血脉健方治疗AS与CD36相关的可能作用机制。
方法:
1.实验动物分组及喂养:将40只雄性8周龄ApoE-/-小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀钙组、骐龙血脉健方大剂量组、中剂量组、小剂量组5组,并以8只雄性8周龄C57BL/6J小鼠作为正常对照组。分别以西方饮食喂养ApoE-/-小鼠,以正常饲料喂养C57BL/6J小鼠。阿托伐他汀钙组给予阿托伐他汀钙溶液灌胃,骐龙血脉健方大中小剂量组分别给予该方中药颗粒剂相应剂量灌胃14周。
2.骐龙血脉健方对ApoE-/-小鼠体重的影响:隔一周对所有小鼠称重一次并记录。
3.骐龙血脉健方对ApoE-/-小鼠血脂水平的影响:14周结束取血,采用生化分析仪器检测各组小鼠血清总甘油三酯(Triglyceride,TG)、总胆固醇(Total Cholesterol, TC)、高密度脂蛋白(High-densitylipoproteincholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白(Low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)水平。
4.骐龙血脉健方对ApoE-/-小鼠腹主动脉血管功能的影响:造模结束前3天,使用超高分辨率小动物超声影像系统对小鼠腹主动脉行超声检查,测定腹主动脉血管收缩末期血管内径(systolic diameter,Ds)、舒张末期血管内径(diastolic diameter,Dd)。
5.探究骐龙血脉健方对CD36介导的AS进程和血小板活化程度的影响:用ELISA法检测小鼠血清中Ox-LDL水平;应用WesternBlot检测主动脉组织中CD36、TSP-1蛋白表达水平;流式技术检测血小板活化率以及血小板CD36表达的水平。
结果:
1.骐龙血脉健方对ApoE-/-小鼠体重的影响:第0周,模型组比空白组体重均数高(P<0.01),但实验各组与模型组相比无差别(P>0.05)。随着时间推移,各组体重均增长。第14周,模型组小鼠体重进一步上涨,体重均数大于空白组(P<0.01)。阿托伐他汀钙组、骐龙血脉健方大、中剂量组体重明显低于模型组(P<0.05)。
2.骐龙血脉健方对ApoE-/-小鼠血脂水平的影响:第14周,与空白组相比,模型组的TC、TG、LDL-C水平明显升高(P<0.01)。与模型组相比,阿托伐组TC、TG、LDL-C均明显降低(P<0.01);骐龙血脉健方大剂量组TC、TG、LDL-C均明显降低(P<0.01);骐龙血脉健方中、小剂量组TC较模型组均明显降低(P<0.01)。各实验组对HDL-C的影响均不明显。
3.骐龙血脉健方对ApoE-/-小鼠腹主动脉血管功能的影响:与空白组相比,模型组腹主动脉收缩末期及舒张末期血管内径明显减小(P<0.01)。与模型组相比,阿托伐他汀钙与骐龙血脉健方大剂量组的收缩末期及舒张末期血管内径明显增大(P<0.01);骐龙血脉健方中、小剂量组收缩末期血管内径均明显增大(P<0.01),中剂量组舒张末期血管内径增大(P<0.05)。
4.探究骐龙血脉健方对CD36介导的AS进程和血小板活化程度的影响:与空白组相比,模型组的血清Ox-LDL含量、主动脉中CD36及TSP-1蛋白表达均明显升高,血小板CD36表达率明显增多、血小板活化率明显升高(P<0.05)。与模型组相比,骐龙血脉健方大剂量组Ox-LDL含量、主动脉的CD36、TSP-1蛋白表达量均明显下降(P<0.01);血小板活化率、血小板CD36表达率亦明显下降(P<0.05)。骐龙血脉健方中剂量组血清Ox-LDL含量、主动脉TSP-1蛋白表达量明显下降(P<0.05)。阿托伐他汀钙组主动脉TSP-1蛋白表达量明显下降(P<0.01);血清Ox-LDL含量、主动脉CD36、血小板活化率、血小板CD36表达率均下降(P<0.05)。
结论:
1.骐龙血脉健方可有效减少ApoE-/-小鼠体重、降低TC、TG、LDL-C和改善腹主动脉弹性,起到抗AS的作用。
2.骐龙血脉健方可能通过降低ApoE-/-小鼠血清Ox-LDL水平以及下调主动脉CD36蛋白表达,抗AS发展。
3.骐龙血脉健方可能通过下调ApoE-/-小鼠主动脉TSP-1蛋白表达、降低血小板CD36表达率及血小板活化率,起到抗AS的作用。
本研究使用ApoE-/-小鼠作为模式动物建立动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)模型,应用骐龙血脉健方干预其致病过程。通过观察用药对小鼠体重、血脂、腹主动脉收缩及舒张功能的影响,及对其血清氧化低密度脂蛋白(Oxidized low-density lipoprotein,Ox-LDL)、主动脉蛋白CD36、血小板反应蛋白-1(Thrombospondin-1, TSP-1)的表达和血小板活化的相关指标的检测,以探究骐龙血脉健方治疗AS与CD36相关的可能作用机制。
方法:
1.实验动物分组及喂养:将40只雄性8周龄ApoE-/-小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀钙组、骐龙血脉健方大剂量组、中剂量组、小剂量组5组,并以8只雄性8周龄C57BL/6J小鼠作为正常对照组。分别以西方饮食喂养ApoE-/-小鼠,以正常饲料喂养C57BL/6J小鼠。阿托伐他汀钙组给予阿托伐他汀钙溶液灌胃,骐龙血脉健方大中小剂量组分别给予该方中药颗粒剂相应剂量灌胃14周。
2.骐龙血脉健方对ApoE-/-小鼠体重的影响:隔一周对所有小鼠称重一次并记录。
3.骐龙血脉健方对ApoE-/-小鼠血脂水平的影响:14周结束取血,采用生化分析仪器检测各组小鼠血清总甘油三酯(Triglyceride,TG)、总胆固醇(Total Cholesterol, TC)、高密度脂蛋白(High-densitylipoproteincholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白(Low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)水平。
4.骐龙血脉健方对ApoE-/-小鼠腹主动脉血管功能的影响:造模结束前3天,使用超高分辨率小动物超声影像系统对小鼠腹主动脉行超声检查,测定腹主动脉血管收缩末期血管内径(systolic diameter,Ds)、舒张末期血管内径(diastolic diameter,Dd)。
5.探究骐龙血脉健方对CD36介导的AS进程和血小板活化程度的影响:用ELISA法检测小鼠血清中Ox-LDL水平;应用WesternBlot检测主动脉组织中CD36、TSP-1蛋白表达水平;流式技术检测血小板活化率以及血小板CD36表达的水平。
结果:
1.骐龙血脉健方对ApoE-/-小鼠体重的影响:第0周,模型组比空白组体重均数高(P<0.01),但实验各组与模型组相比无差别(P>0.05)。随着时间推移,各组体重均增长。第14周,模型组小鼠体重进一步上涨,体重均数大于空白组(P<0.01)。阿托伐他汀钙组、骐龙血脉健方大、中剂量组体重明显低于模型组(P<0.05)。
2.骐龙血脉健方对ApoE-/-小鼠血脂水平的影响:第14周,与空白组相比,模型组的TC、TG、LDL-C水平明显升高(P<0.01)。与模型组相比,阿托伐组TC、TG、LDL-C均明显降低(P<0.01);骐龙血脉健方大剂量组TC、TG、LDL-C均明显降低(P<0.01);骐龙血脉健方中、小剂量组TC较模型组均明显降低(P<0.01)。各实验组对HDL-C的影响均不明显。
3.骐龙血脉健方对ApoE-/-小鼠腹主动脉血管功能的影响:与空白组相比,模型组腹主动脉收缩末期及舒张末期血管内径明显减小(P<0.01)。与模型组相比,阿托伐他汀钙与骐龙血脉健方大剂量组的收缩末期及舒张末期血管内径明显增大(P<0.01);骐龙血脉健方中、小剂量组收缩末期血管内径均明显增大(P<0.01),中剂量组舒张末期血管内径增大(P<0.05)。
4.探究骐龙血脉健方对CD36介导的AS进程和血小板活化程度的影响:与空白组相比,模型组的血清Ox-LDL含量、主动脉中CD36及TSP-1蛋白表达均明显升高,血小板CD36表达率明显增多、血小板活化率明显升高(P<0.05)。与模型组相比,骐龙血脉健方大剂量组Ox-LDL含量、主动脉的CD36、TSP-1蛋白表达量均明显下降(P<0.01);血小板活化率、血小板CD36表达率亦明显下降(P<0.05)。骐龙血脉健方中剂量组血清Ox-LDL含量、主动脉TSP-1蛋白表达量明显下降(P<0.05)。阿托伐他汀钙组主动脉TSP-1蛋白表达量明显下降(P<0.01);血清Ox-LDL含量、主动脉CD36、血小板活化率、血小板CD36表达率均下降(P<0.05)。
结论:
1.骐龙血脉健方可有效减少ApoE-/-小鼠体重、降低TC、TG、LDL-C和改善腹主动脉弹性,起到抗AS的作用。
2.骐龙血脉健方可能通过降低ApoE-/-小鼠血清Ox-LDL水平以及下调主动脉CD36蛋白表达,抗AS发展。
3.骐龙血脉健方可能通过下调ApoE-/-小鼠主动脉TSP-1蛋白表达、降低血小板CD36表达率及血小板活化率,起到抗AS的作用。