目的:应用酶解组织块儿法分离,培养兔牙髓干细胞的基础上探讨肝素对转化生长因子（transforming growth factor）-β₃在体外诱导兔牙髓干细胞（dental pulp stem cells,DPSCs）成骨向分化的能力。方法:新西兰幼兔4只,采用酶解组织块法分离培养兔DPSCs,传代培养至第3代兔DPSCs,分别以含0,5u/mL,10u/m L,20u/mL肝素的培养基培养兔DPSCs,绘制生长曲线,筛选最适浓度的肝素后成骨诱导实验分为空白对照组、TGF-β₃组,肝素组和TGF-β₃+肝素组,空白对照组正常培养,TGF-β₃组在细胞培养基中加入20μg/L TGF-β₃,肝素组在培养基中加入5u/mL肝素,TGF-β₃+肝素组在细胞培养基中同时加入20μg/L TGF-β₃和5 u/mL肝素。各组采用碱性磷酸酶（alkailine phosphate,ALP）试剂盒检测兔DPSCs成骨向诱导后第7、14天细胞内ALP活性,细胞爬片采用免疫细胞化学法检测成骨细胞标记物RUNT相关转录因子2（runt related transcription factor 2,RUNX-2）和骨钙素（osteocalcin,OC）表达情况,采用茜素红染色观察矿化结节形成情况,对肝素组行免疫荧光定量PCR检测RUNX-2,BSP等成骨相关基因mRNA的相对表达量。结果:通过酶解组织块儿法获取的兔牙髓干细胞在诱导体系中生长良好。连续9天的培养后,肝素对兔DPSCs增殖表现为从10u/m L开始有明显的抑制作用,而5u/mL肝素组跟空白对照组没有差异,说明5u/m L肝素对兔DPSCs增殖没有抑制作用,即该浓度肝素对DPSCs没有损害性。TGF-β₃+肝素组第7,14天ALP活性[（27.20±1.01）,（29.06±1.39）u/mg·pro]明显高于TGF-β₃组[（12.69±1.03）,（9.44±1.05）u/mg·pro]和对照组[（5.96±3.68）、（6.10±3.66）u/mg·pro]（P<0.01）,TGF-β₃组明显高于对照组（P<0.001）;TGF-β₃组,肝素组和TGF-β₃+肝素组成骨诱导第7天RUNX-2开始出现阳性表达,第14天TGF-β₃组,TGF-β₃+肝素组OC有阳性表达,对照组和肝素组为阴性;第21天茜素红染色对照组和肝素组为阴性,TGF-β₃组为阳性,TGF-β₃+肝素组为强阳性,PCR结果显示较对照组肝素组有RUNX-2 mRNA表达量上升,而BSP mRNA表达量没有上升。结论肝素有促进TGF-β₃体外诱导兔DPSCs成骨向分化的能力。