论文部分内容阅读
【研究背景】近年来,随着社会、环境、生活习惯等因素的改变,男性不育的比率呈一个明显的上升趋势。据世界卫生组织(World Health Oranization,WHO)调查表明,全球约15%的夫妻面临不孕症的困扰,其中约20%是单独由男性因素引起,还有大概25%是由男女双方因素共同引起。因此完善男性不孕不育相关检查成为临床上的迫切需求。生殖道感染会影响精液的质量,但是临床上尚未有特异性指标去判断生殖道感染对生育力的影响,目前临床上常用的生殖道感染检测方法也存在着各自的局限性。而精浆弹性蛋白酶分布在中性粒细胞、巨噬细胞等多种细胞和组织中,可与其它氧化物质共同发挥局部抗炎效应,并且在精液中分布均匀,用酶联免疫吸附法可以批量检测,差异性小,重复性和准确性高,适用于临床。另外有研究指出,根据弹性蛋白酶数值的不同还可以区分隐性感染或显性感染,可以为患者的正确治疗提供更精确的依据。在辅助生殖的治疗过程中,有相当一部分的患者精液常规检查或者精浆生化检查均未能发现异常,因此探索精子内在的原因越来越被研究者们所重视。DNA是遗传信息的载体,在人类的繁衍和子代遗传性状的表达中起着决定性的作用。精子DNA损伤会降低精子的受精能力和胚胎的发育潜能,从而影响自然怀孕或辅助生殖的妊娠率并可能增加流产率。因此分析精子DNA损伤与精液常规参数及精浆生化之间的关系,探讨精子DNA损伤的影响因素,以及它在男性不育诊断中的应用价值对临床有重要意义。【目的】探讨精浆弹性硬蛋白酶、精子DNA损伤与精液常规检查中的各项主要参数、顶体酶活性和抗精子抗体之间的关系,为男性不育的诊治提供理论依据。【方法】(1)收集2017年7月-2018年4月期间于广州医科大学附属第三医院生殖助孕中心就诊的男性患者的精液标本共464例,整理相关临床资料。(2)按照《世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册第5版》的操作规程进行精液常规检测。(3)采用混合抗球蛋白凝集试验(mixed antiglobulin reaction,MAR)检测精浆中抗精子抗体(anti-sperm antibody,AsAb)的百分比。(4)采用改良Kennedy法检测精子顶体酶活性。(5)采用酶联免疫吸附试验检测精浆弹性硬蛋白酶的浓度。(6)采用流式细胞-吖啶橙法检测精子DNA碎片指数(DNA fragment index,DFI)。(7)将464例样本按照精液常规结果分成正常组(n=120)和异常组(n=344),对两组间参数进行差异和相关性分析;以30%为临界值,把样本分为DFI正常组(DFI<30%,n=382)和DFI异常组(DFI≥30%,n=82),并对两组间的参数进行差异和相关性分析;按照精浆弹性蛋白酶浓度分为:A组(阴性组,精浆弹性蛋白酶浓度<290 ng/ml,n=262)、B组:(隐性感染组,精浆弹性蛋白酶浓度范围为290-1000 ng/ml,n=120)、C组(确认感染组,精浆弹性蛋白酶浓度>1000ng/ml,n=82),对三组间参数进行差异和相关性分析。【结果】(1)精液常规正常组和异常组相比较,年龄、精子头侧摆幅度(amplitude of lateral head,ALH)、DFI和顶体酶活性在两组间差异有统计学意义(P<0.05),其中年龄(r=-0.092,P<0.05)和DFI(r=-0.268,P<0.05)与精液质量呈负相关。ALH(r=0.104,P<0.05)和顶体酶活性(r=0.227,P<0.05)与精液质量呈正相关。其它参数(平均路径速度(average path velocity,VAP)、曲线速率(curvilinear velocity,VCL)、直线速率(straight-line(rectilinear)velocity,VSL)、直线性(linearity,LIN)、前向性(straightness(VSL/VAP),STR)、鞭打频率(beat-cross frequency,BCF),弹性蛋白酶、抗精子抗体、白细胞)两组间无相关性(P>0.05)。(2)精浆弹性蛋白酶阴性组(A组)、隐性感染组(B组)和确认感染组(C组)三组相比较,年龄、PH值、精子顶体酶活性、抗精子抗体和白细胞在三组间差异有统计学意义(P<0.05),其余参数(体积、浓度、前向运动精、精子总活力、存活率、畸形率、VAP、VCL、VSL、LIN、STR、ALH、BCF、DFI)三组间差异无统计学意义(P>0.05)。存在统计学差异的参数进一步在三组间进行两两比对,PH值在阴性组和隐性感染组之间,阴性组和确认感染组之间差异有统计学意义,顶体酶活性在阴性组和隐性感染组之间,抗精子抗体在阴性组和确认感染组之间,白细胞在阴性组和确认感染组之间差异有统计学意义。年龄(r=0.127,P<0.05)、PH值(r=0.206,P<0.05)与精浆弹性蛋白酶浓度呈正相关,顶体酶(r=-0.105,P<0.05)与精浆弹性蛋白酶浓度呈负相关。(3)精子DNA碎片指数正常组和异常组相比较,年龄、精子浓度、PR(前向运动精)、PR+NP(精子总活力)、存活率、畸形率、VAP、VCL、VSL、ALH、顶体酶活性和抗精子抗体在两组间差异有统计学意义(P<0.05)。年龄(r=0.211,P<0.05)、畸形率(r=0.282,P<0.05)、VAP(r=0.106,P<0.05)、VCL(r=0.101,P<0.05)和VSL(r=0.116,P<0.05)与DFI呈正相关,而PR(r=-0.59,P<0.05),NP+PR(r=-0.585,P<0.05),精子存活率(r=-0.529,P<0.05)以及顶体酶活性(r=-0.177,P<0.05)与DFI呈负相关。其他参数(体积、PH、LIN、STR、ALH、BCF、精浆弹性蛋白酶、白细胞浓度)两组间无相关性(P>0.05)。【结论】1.精浆弹性蛋白酶水平表现为和年龄、PH值正相关,与精液常规其它结果不相关。精浆弹性蛋白酶水平升高可能导致精子顶体酶活性降低,抗精子抗体水平增高。2.精子DNA损伤和年龄、精子畸形率呈正相关,精子DNA损伤增加可能导致精子浓度下降,活动力减弱,存活率降低。此外,精子DNA损伤增加还可能导致精子顶体酶活性降低,抗精子抗体水平上升。3.男性的生育年龄需要引起重视,年龄与精子功能有较大相关性,是精浆弹性蛋白酶水平增高和精子DNA损伤增加的危险因素。4.精浆弹性蛋白酶和精子DNA损伤对精液质量有显著的负面影响,对于评价男性生育力有重要意义,临床上可用作精液常规检查以外的补充检查。精浆弹性蛋白酶可作为生殖道感染的指标,精子DNA损伤显著降低精子活动力,建议弱精症患者尤其需要注重精子DNA损伤检测,根据DFI值高低制定相应的治疗方案。