论文部分内容阅读
研究背景肺癌是危害全人类最常见的恶性肿瘤之一,它的发病率和死亡率位居所有恶性肿瘤的首位,并且在我国肺癌的发病人数正在迅速增加。在肺癌中,肺癌总数的80%-85%为非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）,其中65%-80%NSCLC患者在确诊时已属于晚期[1],手术切除率较低,综合治疗成为晚期肺癌的首要治疗方案,而化疗就是这综合治疗的重要组成部分。因为肿瘤耐药性的存在,导致许多患者肿瘤化疗后很快复发或进展,肿瘤的耐药性使很多重要的化疗药物得不到理想的疗效。寻找能预测药物治疗效果的生物标志物及逆转肿瘤对化疗药物的耐药性已成为NSCLC研究的焦点。多西紫杉醇是作用于细胞微管蛋白的抗微管类化疗药物,它的作用机理在于能阻止细胞内微管正常的生理聚集,使肿瘤细胞阻滞在G2/M期,从而引起细胞的凋亡[2]。与其他化疗药一样,多西紫杉醇的耐药性降低了它的疗效。然而临床工作中尚无用于判断NSCLC患者多西紫杉醇治疗耐药的可靠指标。因此进一步研究它的耐药机制,发现新的耐药指标评估肿瘤耐药性,对肺癌个体化治疗,提高化疗疗效,具有很好的临床价值。目的研究FBW7在NSCLC对多西紫杉醇耐药中的作用。探讨FBW7诱导NSCLC耐药的机制,为逆转化疗药的耐药和发明新的化疗药物提供理论基础。方法利用RT-PCR及Western-blot检测目的基因FBW7在非小细胞肺癌多西紫杉醇耐药细胞株SPC-A1/DTX及亲本SPC-A1两种细胞中的表达差异;构建FBW7的过表达序列和干扰序列再经慢病毒包装分别转染SPC-A1/DTX及亲本SPC-A1细胞,通过单克隆筛选方法分别筛选出SPC-A1/DTX FBW7 O/E细胞株和SPC-A1 FBW7 D/R细胞株,再利用RT-PCR及Western-blot检测FBW7基因在SPC-A1/DTX及SPC-A1/DTX FBW7 O/E、SPC-A1及SPC-A1 FBW7 D/R细胞株间的表达差异。最后通过MTT比色法及克隆形成实验比较上调FBW7及下调FBW7的表达后细胞对化疗药物多西紫杉醇敏感性的影响。结果经过RT-PCR及Western-blot证明,FBW7在NSCLC多西紫杉醇耐药细胞株SPC-A1/DTX中的表达显著低于亲本细胞株SPC-A1。通过慢病毒转染及单克隆筛选,构建了FBW7表达下调的SPC-A1 FBW7 D/R细胞株和上调的SPC-A1/DTX FBW7 O/E细胞株。再利用RT-PCR及Western-blot检测到FBW7在SPC-A1细胞株、SPC-A1/DTX FBW7 O/E细胞株中的表达高于SPC-A1/DTX FBW7 O/E细胞株和SPC-A1/DTX细胞株。最后通过MTT比色法及克隆形成实验表明SPC-A1细胞株、SPC-A1/DTX FBW7 O/E细胞株对多西紫杉醇的敏感性高于SPC-A1 FBW7 D/R细胞株和SPC-A1/DTX细胞株。结论非小细胞肺癌对多西紫杉醇的敏感性在FBW7高表达的细胞中要高于FBW7低表达的细胞;FBW7基因的缺失与NSCLC对多西紫杉醇的耐药性有关。但FBW7缺失引起非小细胞肺癌对多西紫杉醇发生耐药的具体机制还需要深入研究。