Hsacirc0005075对肝细胞肝癌的调节作用及其部分机制研究

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肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上第五大常见的恶性肿瘤,其死亡率位居恶性肿瘤的第3位,由于恶性程度高,5年生存率低,早已成为人类最重视的健康问题之一。据统计,中国原发性肝癌患者人数占全世界患者总人数的比例很高,约为50%,每年我国约有24万人死于该疾病。在肝癌的治疗方面,由于外科切除手术及其他治疗手段的发展虽然使得部分患者的生命得以延长,但其治愈效果不容乐观,患者的预后仍然难以得到改善。因此,进一步提高对肝细胞肝癌疾病发病的分子机制的认知,使肝癌患者的生活质量得到改善刻不容缓。随着对各种非编码RNA(包括micro RNA,circular RNA,long non-coding RNA等)的大量研究,为我们带来了一些新的诊断与治疗的希望。其中,环状RNA(circular RNA,circRNA)是一类广泛存在于哺乳动物细胞中、具有调控基因表达作用的内源性RNA分子。其通过外显子环化或(和)内含子环化将3’和5’末端连接起来形成完整环形结构。近年来发现环状RNA(circular RNA,circRNA)在各种肿瘤疾病中如胃癌、乳腺癌、肝癌等扮演着重要角色,其可以通过吸附某些micro RNA从而抑制相应micro RNA下游靶基因的表达。Hsacirc0005075作为环状RNA中的一员,我们检测到其在肝细胞肝癌组织及细胞系中显著高表达,然而hsacirc0005075在肝细胞肝癌中起着什么样的调节作用以及通过何种机制来调节仍不清楚,也没有更多的文献报道相关方面的内容。在本课题中,我们通过在肝癌细胞SMMC-7721中过表达与沉默hsacirc0005075从而初步揭露hsacirc0005075在肝细胞肝癌中的调节作用。我们首先确证了hsacirc0005075在肝癌组织与肝癌细胞中的高表达现象。这种高表达与增殖、迁移及侵袭的SMMC-7721细胞数目的增多有关。相反,沉默hsacirc0005075,与增殖、迁移及侵袭的SMMC-7721细胞数目的降低的有关。此外,通过环状RNA专用性生物学预测网站CircInteractome预测提示,hsacirc0005075可能与miR-431之间存在较好的吸附结合位点。我们接下来通过双荧光素酶报告实验进行了进一步验证。结果显示hsacirc0005075显著抑制了miR-431的转录活性。后续的实验结果表明,在将miR-431抑制剂与沉默hsacirc0005075的慢病毒共转染时,miR-431抑制剂可以明显逆转或部分逆转LV1-hsacirc0005075慢病毒对SMMC-7721细胞增殖、迁移及侵袭所起到的抑制作用。这些结果证明,hsacirc0005075通过调节mi R-431从而促进肝癌细胞SMMC-7721的增殖、迁移与侵袭。
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