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三叉神经痛(trigeminal neuralgia，TN)是神经系统常见疾病，给患者带来巨大痛苦，严重影响患者的生活质量。其病因和病理机制至今尚未完全明确，多数学者认为三叉神经痛的发病是多种因素共同作用的结果，如面部炎症、血管压迫、神经脱髓鞘等。本实验依据面部炎性病因学说建立大鼠三叉神经痛样模型，观察神经妥乐平(Neurotropin，NTP)和丙戊酸钠(sodium valproate，VAP)注射液对福尔马林致痛后大鼠非对称性面部修整行为(Asymmetric face grooming)变化，并测定三叉神经脊束核尾侧亚核(caudal spinal trigeminal nuleus，Vc)浅层和神经节细胞内P物质(substance P，SP)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide，CGRP)的表达，以研究SP和CGRP在TN中的致痛作用，以及NTP和VAP注射液治疗TN的效果。 材料与方法 1．模型建立及分组：健康SD大鼠24只，随机分为4组。A组：对照组，B组：福尔马林刺激+生理盐水组，C组：福尔马林刺激+丙戊酸钠注射液组，D组：福尔马林刺激+神经妥乐平注射液组。在B、C、D组大鼠左侧面部触须垫皮下注射10％福尔马林溶液150μl，在A组大鼠相同部位皮下注射150μl生理盐水，30分钟后A组、B组腹腔注射生理盐水10ml，C组腹腔注射丙戊酸钠注射液10ml(10mg／100g)，D组腹腔注射神经妥乐平注射液10ml(5Nu／100g)。 2．标本处理：四组动物均于面部注射后12小时处死，取中下段脑干和双侧三叉神经节组织，固定，常规石蜡包埋、切片，切片厚度4μm。郑州大学2003届硕士研究生毕业论文神经妥乐平和丙戊酸钠对大鼠面部疼痛的影响 3.观察指标:在面部皮下注射后巧一25分钟(时间I)，40-50分钟(时间H)，60一70分钟(时间m)时用电子秒表分别记录A、B、C、D组大鼠在这三个时间段的非对称性面部修整行为时间。 采用尼氏染色和免疫组化SABC法，在光学显微镜下观察三叉神经脊束核尾侧亚核和三叉神经节细胞，检测SP和CG即在二叉神经节内阳性神经元的百分率，阳性神经元百分率=(阳性节细胞数/总节细胞数)x 100%。对Vc浅层 SP、CGRP阳性纤维染色进行分级:按染色带颜色深浅和宽窄分为三级，1级:浅黄色，窄;2级:黄色，宽;3级:棕黄色，宽。 4.统计方法:应用SPSS10.O统计软件进行数据处理。统计方法采用重复测量数据方差分析、单因素方差分析和秩和检验进行比较，以a=0.05作为检验水准。结果 1.大鼠一侧面部注射福尔马林后烦躁不安，平衡能力下降，出现频繁的非对称性面部修整行为，约1小时后出现精神萎靡，嗜睡倾向等剧烈疼痛反应，表明三叉神经痛样模型已成功建立。 A组大鼠非对称性面部修整行为较少;B组、C组、D组大鼠于福尔马林刺激后出现典型的上述疼痛反应;但C组、D组分别注射VAP、NTP后症状较B组减轻，1小时后无嗜睡表现。 2.大鼠非对称性面部修整行为时间:时间I:A组: 52.23士13.09秒，B组:178.37士25.14秒，C组:178.92士34.42秒，D组:164.14士23.12秒;各组时间I与A组比较差异有统计学意义(p<0.01)，B组、C组、D组组间比较差异均无统计学意义(p>0.05)，表明福尔马林能引起明显的疼痛反应。 时间11:A组:31.97士5.29秒，B组:167.77土44.16秒，C组:74.31士22.70秒，D组:66.59士26.79秒;C组、D组分别与B组比较差异均有统计学意义(p<0.01)，提示VAP和NTP均能使炎性疼痛在40分钟时减轻，C组和D组比较差异无统计学意义(p>0.05)，表明两种药物的镇痛作用无明显差异。 时间111:A组:1 1 .06士6.12秒，B组:78.65士13.48秒，C组:33.77士24.96秒，D组:22.93士18.56秒;C组、D组分别与B组比较差异均有统计学意义(P<0.01)，提示VAP和NTP对福尔马林所致的急性炎性疼痛在60分钟时仍有效，郑州大学2003届硕士研究生毕业论文神经妥乐平和丙戊酸钠对大鼠面部疼痛的影响而c组与D组比较差异无显著性(p>0.05)，表明两药的镇痛疗效无明显区别。 3.SP和CGRP在三叉神经节内的变化:SP、CGRP免疫阳性细胞呈棕黄色，主要分布在注射部位同侧神经节。 三叉神经节内SP阳性神经元百分率为A组:21.37士2.08%，B组:31.31士2.27%，C组:25.62士2.24%，D组:26.56士1.82%。B组与A组比较差异有统计学意义，提示福尔马林刺激引起神经节内SP含量增加;C组、D组分别与B组比较差异均有统计学意义勿<0.01)，表明注射VAP或NTP后可使三叉神经节内的SP含量降低，但是两种药物降低SP含量的效果差异无显著性切>0.05)。 神经节内CGRP阳性神经元百分率分别为A组:38.47士1 .53%，B组:46.69士3.59%，C组:42.65士2.25%，D组:43.75士2.70%。B组与A组比较差异有统计学意义(p<0.01)，表明福尔马林刺激会引起同侧神经节细胞内CGRP含量增加。c组与B组、D组与B组比较差异有统计学意义(p<0.01)，提示VAP和NTP对三叉神经节内CG即含量有降低作用。C组与D组比较差异无统计学意义 (p>0.05)，表明两种药物降低CGRP的程度相似。 4.SP和CGRP在Vc浅层内的变化:SP、CGRP主要分布在Vc浅层纤维，免疫组化染色阳性纤维呈黄色。 SP在Vc浅层B组与A组?