亚甲蓝（methylene blue,MB）是一种吩噻嗪盐,临床上用来治疗高铁血红蛋白血症及氰化物中毒等。现有研究表明,MB具有抗氧化和线粒体保护的作用,可减轻缺血再灌注引起的氧化损伤,并且MB线粒体保护的分子机制与上调Nrf2/ARE基因有关。HO-1作为Nrf-2的下游产物,是细胞防御中的关键酶,能减少伤害性刺激诱导的炎症和氧化损伤,在ROS对细胞损伤的保护中起着关键的作用。本课题的目的是研究MB在过氧化氢（hydrogen peroxide,H₂O₂）诱导的巨噬细胞RAW264.7氧化损伤中起到的保护作用,并阐明其保护作用与HO-1蛋白之间的联系。本课题以H₂O₂诱导的RAW264.7细胞建立氧化应激模型,用不同浓度的MB对细胞进行预处理和后处理。通过MTT和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）检测细胞损伤程度;通过活性氧（reactive oxygen species,ROS）浓度、H₂O₂活性、超氧化物歧化酶（superoxyde dismutase,SOD）活性和三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）生成量检测细胞的氧化损伤;同时,用高内涵细胞分析仪检测线粒体膜电位（Mitochondrial membrane potentia,MMP）和细胞内钙离子浓度评价线粒体功能;最后,通过流式细胞术和测定半胱天冬酶-3蛋白表达和活性来检测RAW264.7细胞凋亡情况。结果显示,0.1和1μM浓度的MB预处理和后处理均能在H₂O₂诱导的RAW264.7细胞氧化损伤中起到保护作用,尤其是0.1μM浓度的MB预处理治疗效果最好,表现为有效减轻细胞损伤、增强线粒体功能和减少细胞凋亡。为了阐明MB在RAW264.7细胞氧化损伤中的保护作用与HO-1蛋白之间的联系,首先对HO-1蛋白表达和活性进行检测,结果显示0.1和1μM浓度的MB预处理和后处理均能增加RAW264.7细胞中HO-1的蛋白表达水平。然后利用HO-1 siRNA以及HO-1活性抑制剂锌原卟啉抑制HO-1蛋白表达和酶活性。结果显示,HO-1 siRNA和锌原卟啉明显降低了MB在抵御H₂O₂诱导的细胞损伤、氧化应激和线粒体损伤中的有益作用,说明了MB对H₂O₂诱导的细胞氧化损伤的保护作用主要依赖于HO-1。总之,MB通过上调HO-1的蛋白表达和酶活性减轻H₂O₂诱导的RAW264.7细胞氧化损伤。