鸡志贺氏菌病是近年发现的鸡的一种新发传染病,该病是由鸡志贺氏菌引起的一种急性传染病,可引起不同品种、不同日龄的鸡发生腹泻,并可导致雏鸡死亡。当前的研究结果表明,鸡志贺氏菌病流行范围广泛,危害严重,其传播流行给我国养禽业造成了巨大的经济损失。又因志贺氏菌可能在人禽间造成交互感染,这就给人类公共卫生安全造成了严重隐患。因此,对鸡志贺氏菌病展开研究不但具有重要的兽医卫生学意义,而且具有重大的医学公共卫生学意义。本课题以本实验室分离鉴定保存的鸡鲍氏志贺氏菌为研究材料,在鸡鲍氏志贺氏菌疫苗免疫抗体间接ELISA定量检测方法的基础上,进行了鸡鲍氏志贺氏菌双抗体夹心ELISA检测方法的研究。研究结果如下:首先,本研究以鸡鲍氏志贺氏菌灭活铝胶苗免疫健康成年公鸡,通过免疫过程中用鸡鲍氏志贺氏菌疫苗免疫抗体间接ELISA定量检测方法适时检测,获得高效价免疫血清。使用饱和硫酸铵法提取鸡鲍氏志贺氏菌IgG,并通过DEAE-52离子交换层析进行纯化。其次,选用辣根过氧化物酶(HRP)分别以戊二醛两步法和简易过碘酸钠法对纯化后的鸡鲍氏志贺氏菌IgG进行标记。通过产物检测,确定标记方法为简易过碘酸钠法,并分离纯化酶标记物IgG-HRP。然后,以鸡鲍氏志贺氏菌IgG为包被抗体,以鸡鲍氏志贺氏菌IgG-HRP为酶标抗体,成功建立了检测鸡鲍氏志贺氏菌的双抗体夹心ELISA检测方法。并对双抗夹心ELISA的最佳工作条件进行了优化,最终确定:鸡鲍氏志贺氏菌抗体包被浓度为5ug/mL,包被最佳条件为4℃12h;最佳封闭条件为每孔100μL 1%BSA,37℃封闭1h;待测抗原与包被抗体的最适反应条件为37℃1.5 h;酶标抗体最佳稀释度为1:200,最佳工作条件为37℃1h;底物显色最佳条件为37℃20min。特异性试验、敏感性试验、重复性试验等结果表明建立的鸡鲍氏志贺氏菌双抗体夹心ELISA检测方法具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点。包被的鸡鲍氏志贺氏菌IgG与其他易引起腹泻的病原菌无交叉反应;板内变异系数0.31%～0.53%,板间变异系数为0.50%～0.84%;建立双抗夹心ELISA方法的最低检出限为105 cfu/mL。建立的方法初步进行应用,为鸡鲍氏志贺氏菌病的病原检测提供了一种新的技术手段,便于在生产中推广。