【摘 要】
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为深入了解猪乳中蛋白质的组成及其变化规律,对采自四川西昌的大约克猪（n=32）共50个乳样中的蛋白质组成和含量、3种蛋白质遗传多态性进行了分析,并对乳中一种高分子量蛋白（HMWP）进行了初步纯化和鉴定。主要内容和结果如下:（1）对大约克猪的初乳、常乳进行了研究,结果表明:泌乳第1天（D1）乳中蛋白质含量最高;SDS-PAGE在乳中检测到酪蛋白、免疫球蛋白、β-乳球蛋白、α-乳清蛋白、乳清酸蛋白和高
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为深入了解猪乳中蛋白质的组成及其变化规律,对采自四川西昌的大约克猪（n=32）共50个乳样中的蛋白质组成和含量、3种蛋白质遗传多态性进行了分析,并对乳中一种高分子量蛋白（HMWP）进行了初步纯化和鉴定。主要内容和结果如下:（1）对大约克猪的初乳、常乳进行了研究,结果表明:泌乳第1天（D1）乳中蛋白质含量最高;SDS-PAGE在乳中检测到酪蛋白、免疫球蛋白、β-乳球蛋白、α-乳清蛋白、乳清酸蛋白和高分子量蛋白等组分,这些蛋白质的含量均随泌乳而变动。（2）利用iTRAQ技术分析D1、D3和D15猪乳中的差异表达蛋白（DEPs）,共鉴定出612种蛋白质,以D1作为对照组,在D3和D15乳中分别检测到243种和384种DEPs。KEGG富集分析表明,D3和D15乳中的DEPs参与最多的是代谢途径。这些结果揭示了猪初乳和常乳中多种微量蛋白质组分的变化。相关变化可能反映了乳腺机能改变以及仔猪不同发育阶段的需求。（3）从猪乳中提取基因组DNA,利用PCR技术扩增了β-酪蛋白（β-CN）编码基因CSN2的部分序列,直接测序确定了CSN2基因上一个多态位点（c.647G＞A）,其中G为优势等位基因,该突变导致精氨酸（Arg）突变为谷氨酰胺（Gln）。根据本研究测序结果,试验猪推导的β-CN序列在体内消化后不产生酪啡肽,这一点与牛β-CN不同。（4）SDS-PAGE分析显示,猪乳中的HMWP共检测出A、B、C和D型4种变异体,分子量分别为121.33±0.79 kD、109.64±0.77 kD、106.41±0.36 kD和102.09 kD,其中B变异体占优势。HMWP共5种蛋白表型,分别为AB、BB、BC、CC和CD,显示出丰富的多态性,AB和BC为优势表型。HMWP表型稳定,且在D15乳中的表达量显著高于D1。（5）SDS-PAGE结合银染显示,猪乳中上皮黏蛋白（MUC1）共检测出A和B变异体,其中B变异体占优势。MUC1表现出AA、AB和BB共3种蛋白表型,BB表型占优势。MUC1表型稳定,且在D15乳中的表达量显著高于D1。（6）通过对大约克猪全乳进行脱脂、等电点沉淀去除酪蛋白、硫酸铵盐析处理获得HMWP-AB的粗品,经过High Q阴离子交换柱层析、分子筛层析等过程后获得了纯度达51.09%的HMWP-AB。经串联质谱鉴定,该蛋白可能是谷胱甘肽转移酶。
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