串珠镰刀菌素的提取及其对鸡免疫功能的影响

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本论文以国内从玉米上分离的两株串珠镰刀菌(菌株1和菌株2)为研究对象。参照章红、赵献军等方法将菌株接种正常玉米面培养基进行产毒培养,经过25℃10d、4℃7d、25℃lOd的培养过程,得到的培养产物60℃烘干粉碎后,用乙醚提取出粗制毒素,进行兔子皮肤毒性试验,结果发现菌株1对兔子皮肤有一定的毒性,而菌株2则没有毒性反应。采用乙腈一水(95:5)从培养物中抽提MON,经薄层色谱法和高效液相色谱法检测,结果发现:TLC分析,菌株1的提取液与MON标准应用液的盯值均为5.6,并有桃红色斑点显现,而菌株2的提取液则无;HPLC分析,菌株1提取液的出峰时间在7.439mtn,与MON标准应用液的出峰时间7.423相吻合,而菌株2则在这一时间段无峰出现。这说明菌株1能产生MON,而菌株2不会产生MON,因此,本试验选用菌株1进行产毒培养。 将菌株1接种正常玉米面培养基,进行大量产毒培养,将其产毒培养物采用乙腈一水(95:5)提取MON,经50℃水浴,减压浓缩后,50℃水溶解浓缩物,收集瓶中,共计L1L。再将上述提取液经Strata—C18一E固相萃取小柱净化,采用HPLC进行分析,同时将MON标准应用液稀释为7个不同浓度制备标准曲线,并在正常玉米面中加入不同浓度的MON标准应用液求出回收率,以峰高值计算出提取液中MON的含量。结果表明:7个不同浓度的标准应用液制备的标准曲线有良好的线性关系,回收率为76.58%,提取液中MON的浓度为¨6ug/mL。 用制备的MON进行1日龄雏鸡LDs。试验,结果表明:MON对1日龄雏鸡的LD5。为6.76mg/kg,毒性较强。本试验选用l日龄芦花鸡进行MON攻毒试验,测定MON对其免疫功能的影响。试验设两组:一组为对照组,饲喂常规饲料;一组为试验组,饲喂添加MON(23.2ppm)的饲料。试验共持续55d,分别在15日龄、27日龄、35日龄、45日龄、55日龄时采样,各组6只(3♂、3♀),进行血液的淋巴细胞ANAE阳性率、T淋巴细胞转化率和血清中抗NDV的眦效价、N0含量、白介素一2含量的检测,同时观察病理变化和进行病理组织学检查。结果表明:①饲料中含有一定浓度的MON会引起小鸡的轻度腹泻以及明显的生长迟缓,但不会引起死亡;②MON会导致小鸡的肝脏颜色变浅,呈淡黄色,胆囊扩张,心肌松软,部分小鸡心包有积液,部分肠壁有出血斑点。组织切片镜检发现心肌轻度颗粒变性,肝细胞颗粒变性,部分肝细胞空泡变性,肠粘膜上皮轻度脱落;③试验组小鸡的免疫器官重量减轻,血液中T淋巴细胞比例下降,T淋巴细胞转化率降低,血清中抗NDV的HI效价降低,这说明了一定浓度的MON会使鸡的免疫功能受到抑制;④试验组小鸡血清中№含量增加,白介素一2含量降低,说明了MON会增加№的含量引起机体受损,白介素一2的含量降低也显示了MON能影响机体的免疫调节。 本试验成功地制备出MON毒素,为研究MON对鸡免疫功能的影响打下了基础。采用一定浓度攻毒雏鸡,结果证实了MON对鸡的毒害作用,并能使鸡的免疫功能受损,也会影响疫苗的保护能力;同时由于MON对心肌等组织的损害导致血清中N0含量增加,反过来损伤机体;白介素一2的生成减少使得机体免疫调节能力下降。本研究表明:饲料中含有一定浓度的MON不但会影响鸡的生长速度,还会使鸡的免疫功能受损,本试验结果为畜禽的疾病防治提供了一定的理论依据。
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