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目的：构建真核重组质粒,体外表达PLA2R蛋白；运用双抗夹心原理建立抗PLA2R抗体的间接免疫荧光检测方法（IIFT）；通过检测MN患者血清和尿液抗PLA2R抗体,观察血清和尿液抗体与患者疾病严重程度和组织病理改变的相关性。方法：1.PLA2R真核重组质粒的构建和蛋白表达基因库查找PLA2R全长mRNA序列,合成全长基因,构建pcDNA3.1/Hygro-PLA2R-IRES2-eGFP和pcDNA3.1/Hygro-PLA2R-His重组质粒。通过Lipofectamine2000介导质粒瞬时转染HEK293T细胞,进行目的蛋白表达,运用流式细胞技术、免疫荧光、免疫组化和WB方法对表达蛋白进行鉴定。2.抗PLA2R抗体IIFT的建立与验证用表达目的蛋白的HEK293T细胞作为捕获抗原与MN患者血清中的抗PLA2R抗体进行结合,再用二抗进行荧光标记,建立抗PLA2R抗体IIFT。用自建的抗体检测方法对150例肾小球疾病患者和30例健康成人血清进行检测,同时用国外检测试剂盒作为对照,评价自建检测方法的有效性,明确抗体对原发性MN患者的诊断特异性。3.抗PLA2R抗体在MN中的临床研究收集长征医院114例原发性MN和18例存在继发因素MN患者的血清、尿液,用自建的抗PLA2R抗体IIFT对患者血清和尿液进行定性检测,记录患者的临床资料和病理报告,采用聚合免疫散射法对患者血清IgG和IgG4进行定量检测。观察原发性MN患者血清抗体阳性组和阴性组的临床指标和病理的差异性,并对血清IgG和IgG4值进行分析；将血清抗体阳性的原发性MN患者分为尿液阳性组和阴性组,观察两组患者临床指标和病理分期的差异性。对存在继发因素MN患者的血清和尿液抗体进行检测,观察抗体的阳性率。结果：1.选取基因库中PLA2R的1型转录体全长mRNA（NCBI,NM007366.4）作为目的基因,合成全长碱基序列,通过酶切手段构建PLA2R的真核重组质粒pcDNA3.1/Hygro-PLA2R-IRES2-eGFP和pcDNA3.1/Hygro-PLA2R-His,运用Lipofectamine2000将重组质粒瞬时转染HEK293T细胞,通过免疫组化、流式细胞学技术、免疫荧光和WB方法鉴定PLA2R蛋白的表达。2.用表达PLA2R蛋白的HEK293T细胞作为捕获抗原,建立抗PLA2R抗体的IIFT。用该方法对150例肾小球疾病患者和30例健康成人血清进行检测,结果抗体仅出现在原发性MN患者血清中,其它肾小球疾病和健康成人均为阴性,自建检测方法与国外试剂盒的检测结果一致。3.114例原发性MN患者有84例（73.68%）血清抗体阳性,阳性组血清白蛋白、甘油三酯、肌酐、IgG、24h蛋白尿、尿TRF、IGU、eGFR和组织病理分期与阴性组存在差异（p<0.05）,而血清胆固醇、IgG4及IgG4/IgG值间差异无统计学意义（p>0.05）；18例存在继发因素的MN患者有6例血清抗体阳性。血清抗体阴性患者的尿液抗体均阴性,84例血清阳性患者有60例（71.42%）尿液抗体阳性,占总例数的52.63%；尿液阳性组血清白蛋白、肌酐、尿TRF、IGU和eGFR与阴性组存在差异（p<0.05）,而血脂、24h蛋白尿、血清IgG、IgG4、 IgG4/IgG和组织病理无统计学差异（p>0.05）；6例存在继发因素、血清抗体阳性的MN患者有4例尿液抗体阳性。结论：本课题构建的PLA2R真核重组质粒能表达PLA2R蛋白,自建的抗PLA2R抗体IIFT能有效检测MN患者的抗PLA2R抗体。检测抗PLA2R抗体可以作为诊断原发性MN的一种方法,其在原发性MN血清中的阳性率为73.68%,在尿液中阳性率为52.63%；抗PLA2R抗体在存在继发因素的MN患者血清中有部分阳性,但未在其他肾小球疾病和健康人群血清中检测到。血清抗体与患者的临床指标显著相关,而尿液抗体可能与患者肾功能损伤程度有关,抗体的出现提示患者临床病情和肾脏损伤程度加重。