多种生长因子复合物纤维蛋白凝胶释放系统对人胚肺成纤维细胞增殖分化的影响

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目的通过体外建立并比较不同“多种生长因子复合物纤维蛋白凝胶释放系统”,寻找促进人胚肺成纤维细胞生长增殖分化最佳释放系统。方法测定培养基中“纤维蛋白凝胶释放系统”释放曲线,加入生长因子复合物(PDGF、TGF、VEGF、EGF),建立“多种生长因子复合物纤维蛋白凝胶释放系统”。取传至3~5代人胚肺成纤维细胞培养,分为有生长因子实验组A和无生长因子对照组B两组,每组分4亚组:①纤维蛋白凝胶全覆盖组(A1、B1组)②纤维蛋白原全覆盖组(A2、B2组)③岛状凝胶组(A3、B3组)④碎片状凝胶组(A4、B4组),设置无凝胶对照组C:生长因子组(C1组)、无生长因子组(C2组)。连续观察7~14天,观察细胞形态,测定细胞数,并用MTT法测定相对细胞活性,观察比较不同释放系统对细胞生长增殖的影响。结果(1)不同凝胶释放系统释放曲线的差异:岛状与碎片状组凝胶释放无统计学差异(P>0.05),纤维蛋白凝胶全覆盖组与岛状、碎片组有统计学差异(P<0.001),全覆盖组释放高峰落后于岛状和碎片状组。(2)A1、A2、B1、B2组均无细胞生长,A3、A4、B3、B4组细胞生长良好,增殖活跃。(3)凝胶内带细胞生长增殖最慢,外带最快,中带介于两者之间。随着凝胶溶解,细胞向内带迁移,增殖速度逐渐增快。(4)生长因子组细胞增殖速度明显快于无生长因子组(P<0.001)。(5)生长因子组细胞生长情况:A4组优于A3组及C1组,A3组优于C1组(P<0.001);无生长因子细胞生长情况:B4组优于B3、C2组,而C2组生长情况优于B3组(P<0.001)。(6)细胞增殖情况评估细胞计数法和MTT法测得OD值存在一定线性关系,并呈正相关关系(生长因子组:A3组r=0.929,P<0.001;A4组r=0.863,P<0.001;C1组r=0.716,P<0.005。无生长因子组:B3组r=0.706,P<0.005;B4组r=0.423,P<0.05;C2组r=0.512,P<0.05)。结论1、多种生长因子复合物纤维蛋白凝胶释放系统具有促人胚肺成纤维细胞生长、增殖、分化作用。2、岛状和碎片状二维凝胶模型可作为生长因子载体,稳定其生物学活性,保证缓慢、有效地释放,持续促进人胚肺成纤维细胞增殖。3、碎片凝胶二维模型对人胚肺成纤维细胞增殖促进作用明显优于岛状凝胶二维模型,更利于细胞的生长、增殖、分化。
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