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农药对农业增产的作用是不言而喻的,同样,农药的大量使用所带来的对环境和人类本身的危害也是不容忽视的。有机磷农药曾因毒性低,残留时间短,易挥发、易降解等因素一度受到使用者的青睐,但由于长期大量的使用,仍对环境造成很大危害,因此,研究其污染的治理具有重要意义。 有机磷农药降解途径中,生物降解最为重要。本研究从长年施用乐果的土壤中分离筛选出来一批微生物,其中细菌菌株共200多株,真菌共100多株,它们均能在以乐果农药为唯一碳源的培养基上生长。通过进一步的筛选优化,获得5株能在高浓度乐果中生长的细菌,分别编号为L-a,L-b,L-c,L-d,L-e。采用气象色谱法测定上述菌株的降解活性,结果显示该五株细菌均活性较强。其中,48h内L-a共降解乐果648mg/L,L-b共降解乐果1,43 lmg/L,L-c共降解乐果904 mg/L,L-d共降解乐果994mg/L,L-e共降解乐果1,494mg/L。我们对菌株L-b进行深入研究,该菌株能耐受浓度达10,000mg/L的乐果农药,其最适生长温度为28-30℃,在18-42℃的广泛温度范围内仍生长良好,最适生长pH值为7.0左右,同样具有广泛的pH值生长范围(pH6.0-pH9.0)。本实验采用ITS(internal transcribed spacer)菌种鉴定方法,辅以常规鉴定步骤对所研究的菌株进行鉴定。其中ITS序列扩增的引物分别为:16SF:5′ AGTCGTAACAAGGTAGCCGT 3′;23SR:5′GTGCCAAGGCATCCACC 3′。PCR扩增产物克隆测序后登陆 GenBank+EMBL+DDBJ+PDB数据库检索,检索结果指出所研究菌株为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa),即绿脓杆菌。常规鉴定方法显示,该菌株能在绿脓杆菌的鉴定分离培养基(十六烷三甲基溴化铵平板)上生长,革兰氏染色为阴性,氧化酶试验及绿脓菌素试验均为阳性,因此,我们可认为该菌即为绿脓杆菌。初步确定菌株L-b具有广谱的降解有机磷农药的能力,因其在基础培养