【摘 要】
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目的:本课题计划在肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)的多系细胞系中对lncRNA HAND2-AS1的表达量进行鉴定,并在此基础上深入探究其在HCC细胞系的侵袭迁移和增殖中发挥的功能。对其在肝癌的始发与发展中的机制展开探讨,从而为HCC的临床治疗带来新的靶标。方法:1通过RT-PCR检测lncRNA HAND2-AS1在不同HCC细胞系中的表达情况,正常肝细胞系L
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目的:本课题计划在肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)的多系细胞系中对lncRNA HAND2-AS1的表达量进行鉴定,并在此基础上深入探究其在HCC细胞系的侵袭迁移和增殖中发挥的功能。对其在肝癌的始发与发展中的机制展开探讨,从而为HCC的临床治疗带来新的靶标。方法:1通过RT-PCR检测lncRNA HAND2-AS1在不同HCC细胞系中的表达情况,正常肝细胞系L02作为对照。2选取上述检测结果中lncRNA HAND2-AS1表达最低的两种HCC细胞系进行细胞转染。随后分成3组:(1)无任何干预的空白组(blank组);(2)行空质粒转染的对照组(CON组);(3)行过表达质粒转染的实验组(HAND2-AS1组)。用RT-PCR检测转染效率。并用细胞划痕、TRANSWELL和MTT实验分别在两种细胞系中分析上述3组细胞系的迁移、侵袭和增殖能力。3用western blot实验分别检测上述两种细胞系blank组、CON组以及HAND2-AS1组中PI3K、AKT蛋白的含量。4用AKT激动剂处理过表达HAND2-AS1的细胞系将其归为AKT组分,在此前提下将PI3K抑制剂LY294002加入其中,将其命名为LY294002组。随后分别在两种细胞系中比较各组细胞系表现出的迁移、侵袭和增殖能力。结果:1与L02这一正常肝细胞系对比,lncRNA HAND2-AS1在HCC细胞系Hep G2、SMMC-7721、Hep 3b、PLC、Huh-7、MHCC-97H、MHCC-97L中的表达明显下降,其中,相较于其他HCC细胞系,lncRNA HAND2-AS1在SMMC-7721和MHCC-97H细胞系中的表达量更低。2 blank组和CON组HCC细胞系的迁移、侵袭和增殖能力无差别。与blank组和CON组相比,HAND2-AS1组HCC细胞系的迁移、侵袭和增殖能力明显下降。3 blank组、CON组HCC细胞系的PI3K和AKT表达差异不显著。而相较于blank组和CON组,PI3K和AKT蛋白在HAND2-AS1组的两种HCC细胞系中的表达明显下降。4与HAND2-AS1组相比,AKT组细胞系迁移、侵袭和增值能力明显加强,而当加入PI3K抑制剂后,这一增强效果被削弱。结论:1 LncRNA HAND2-AS1在HCC细胞系中表达量明显降低,通过调节PI3K-AKT信号通路发挥了重要的抑癌作用。2通过过表达lncRNA HAND2-AS1,可以明显降低HCC细胞系的迁移、侵袭和增殖能力。
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