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WRKY转录因子广泛参与了植物的生长发育调控及其对逆境胁迫应答,其中WRKY Ⅱa基因家族在植物对病害的抗性中发挥重要作用。木薯(Manihotesculenta Crantz)作为重要的热带经济作物,地毯草黄单胞菌木薯萎蔫致病变种(Xanthomonas axonopodispv.Manihotis,Xam)引起的细菌性枯萎病是制约其产量提高的重要因子。因此,深入研究WRKYⅡa基因家族在木薯应答病原菌Xam浸染中的作用具有重要的实践意义。本研究以华南8号木薯为材料分离了WRKYⅡa家族的6个基因,并通过表达模式分析、亚细胞定位、VIGS、转基因等技术对候选的6个基因的功能进行了初步研究,取得主要实验结果如下:(1)通过木薯全基因组扫描从中筛选出102个具有WRKY结构域的WRKY基因,经与拟南芥、水稻的WRKY Ⅱa亚族基因系统进化分析候选了木薯WRKYⅡa家族共有 6 个成员,分别为 MeWRKY27、MeWRKY28、MeWRKY33、MeWRKY64、MeWRKY89、MeWRKY90。(2)亚细胞定位结果表明 MeWRKY27、MeWRKY28、MeWRKY33、MeWRKY64、MeWRKY89、MeWRKY90都定位于细胞核中。(3)转录激活活性分析表明在Y2H酵母菌株中MeWRKYⅡ a能够激活Ga14转录因子的表达,具有转录激活活性;MeWRKYⅡa在酵母体内能与W-box结合,显著提高ABA的抑制浓度。(4)Q-PCR检测结果表明MeWRKYⅡa基因都受到SA诱导而表达,MeWRKY27、MeWRKY64和MeWRKY89表达明显受到Eth的诱导,MeWRKY27、MeWRKY33和MeWRKY90明显受到了 JA的诱导。病原菌Xam处理下MeWRKY27、MeWRKY33和MeWRKY64表达量有明显的上调。(5)MeWRKYⅡa基因参与木薯抗病途径。过表达MeWRKYⅡa亚族6个基因的拟南芥植株分别接种Xam后,病斑检测结果表明MeWRKY27、MeWRKY33转基因植株的发病程度低于野生型植株。(6)目的基因连接到到TRV载体上形成重组质粒转化农杆菌后侵染木薯SC8,并同时接种病原菌Xam,结果表明:所有的MeWRKYⅡa均能被有效地沉默,且TRV:MeWRKY27、TRV:MeWRKY33、TRV:MeWRKY64、TRV:MeWRKY90 沉默植株产生的水渍状浸斑与野生型相比扩散面积更大,沉默后的植株抗病性明显减弱;TRV:MeWRKY89沉默植株产生的水渍状浸斑明显小于野生型,抗病性增强。