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热应激对肉鸡的生长发育有负面影响,导致生长性能下降,发育缓慢,同时也会影响肉鸡的屠宰性能,使肉质品质下降并引起抗氧化能力损伤,已成为造成养殖业经济损失的重要环境因素之一。ATP结合盒转运蛋白G2(ATP-binding cassette transporters G2,ABCG2)可以利用水解ATP所产生的能量将与其结合的底物外排出细胞,能够转运和外排有害物质,在促进和维持多种应激状态下机体细胞和组织的稳定方面具有重要作用。因此研究ABCG2对于热应激的影响和调控机理在临床应用上具有重要意义。本论文的研究内容包括三部分:第一,为了研究不同热应激时间对肉鸡生长性能、肉质和抗氧化能力的影响,本试验分为对照组(25±2℃)和热应激组(37±2℃),各组自由采食饮水,热应激试验期为14 d,分别于热应激1周和2周屠宰采样分析。结果显示,热应激使肉鸡采食量和日增重显著下降,料重比升高,饲料转化率降低。肌肉pH和持水力显著下降,剪切力显著增大,而肉色几乎无差异,同时MDA显著增加,SOD、GSH-Px和T-AOC含量显著减少,抗氧化能力下降。表明热应激可以降低肉鸡的生长性能。第二,为了研究不同热应激时间ABCG2在肉鸡肌肉的表达和定位的变化,本试验首先将对照组和热应激组的肌肉组织进行RNA提取,反转录成cDNA作为模板,合成ABCG2基因引物,运用荧光定量PCR和免疫组化方法对ABCG2进行表达和定位,免疫组化结果表明,ABCG2定位与细胞膜。RT-PCR和荧光定量PCR结果显示ABCG2基因在对照组和热应激组中均有表达,且表达量存在显著差异,热应激1周后ABCG2基因的表达量无显著差异,而热应激2周后胸肌(P<0.01)和腿肌(P<0.05)均显著高于对照组。第三,为了探究热应激如何通过ABCG2的表达量变化来调节在热应激影响下在骨骼肌的生长和发育表达量变化的原因,本试验选用首先在体外分离和培养成肌细胞进行试验,试验然后将细胞分为对照组(37 ± 1℃)、热应激组(42 ± 1℃)和抑制剂组(42 ± ℃,20μM KO143)。试验发现,ABCG2与AMPK信号通路上所选的各基因在受到热应激影响后表达量均显著降低(P<0.01);在添加了抑制剂后,ABCG2基因表达量相比热应激组显著降低(P<0.05),TAK1、AMPK和mTOR基因在添加抑制剂后与热应激组均无显著差异(P>0.05),而AMPK下游的eEF2基因表达量与热应激组相比显著降低(P<0.01)。综上所述,本试验发现热应激会导致黄羽肉鸡生长性能、肉质和抗氧化能力的下降。通过免疫组化和荧光定量PCR发现了 ABCG2基因定位于细胞膜,且受到热应激影响,ABCG2表达量会发生上调。热应激后ABCG2与AMPK信号通路上所选各基因均发生变化,在添加ABCG2基因抑制剂KO143后进一步发现ABCG2与AMPK的下游基因eEF2进一步下调。证明ABCG2基因作用位点在与AMPK和eEF2之间,通过该通路调节蛋白质的合成从而调控肉鸡的生长发育。