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目的:为开发一款具有提高免疫力功效的大健康产品,基于中医基础理论,对传统古方进行组合优化,以归脾汤为基础方,采用药食同源药物对其进行有效加减,优选出参苓补益汤,本研究主要开展参苓补益汤的最佳提取工艺优化及免疫活性的调节作用研究。方法:1.参苓补益汤的制备工艺研究:考察提取时间、提取次数、加水倍数因素,以粗多糖含量为指标,以苯酚-硫酸法测定参苓补益汤中粗多糖的含量,通过正交试验确定最佳提取工艺。2.参苓补益汤小鼠体内免疫功能的调节作用:选用昆明种小鼠,随机分成对照组、模型组和本方低、中、高剂量组,用环磷酰胺(Cyclophosphamide,CYP)诱导的方法,建立免疫抑制的小鼠模型,持续灌胃30天,计算小鼠免疫器官(脾、胸腺)脏器指数、在显微镜下计数外周血白细胞数、用酶联免疫吸附法检测小鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、免疫球蛋白G(IgG)和干扰素-γ(IFN-γ)水平、并检测脾淋巴细胞增殖能力与凋亡率和巨噬细胞吞噬功能。3.参苓补益汤体外免疫功能的调节作用:选用小鼠RAW264.7巨噬细胞系为细胞模型,脂多糖LPS为阳性对照组,采用CCK-8法检测细胞活力,中性红染色法测定细胞吞噬能力,一氧化氮和ELISA试剂盒分别测定细胞内NO、TNF-α、IL-1β和IL-6含量。选用小鼠脾淋巴细胞为细胞模型,刀豆蛋白ConA为阳性对照组,检测参苓补益汤的免疫调节功能,采用CCK-8法检测细胞活力,ELISA试剂盒分别测定细胞内IFN-γ和IL-2含量。结果:1.参苓补益汤的最优提取的最佳工艺:6味药加15倍水,提取3次,每次1.5h。2.成功建立免疫抑制的小鼠模型。参苓补益汤提取物能够增加环磷酰胺导致的免疫抑制小鼠睥和胸腺的脏器指数、增添小鼠外周血白细胞数量、提升肿瘤坏死因子-α、免疫球蛋白G和干扰素-γ水平、增强淋巴细胞增殖的细胞活力、抑制淋巴细胞的各期凋亡率和总凋亡率并且增强小鼠巨噬细胞吞噬功能。3.与Control组比较,参苓补益汤能够显著促进巨噬细胞和脾淋巴细胞活性,且无细胞毒性,上调巨噬细胞中NO及TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌,增强吞噬活性;上调脾淋巴细胞中IFN-γ和IL-2的分泌。结论:优选出参苓补益汤的最佳提取工艺。发现参苓补益汤能够全面的从固有免疫、体液免疫等方面调节环磷酰胺导致的免疫抑制小鼠免疫功能低下作用。参苓补益汤能够提升小鼠RAW264.7巨噬细胞和脾淋巴细胞的免疫活性。