论文部分内容阅读
目的: 糖尿病肾病(DN)是糖尿病(DM)最为常见的慢性并发症之一，课题组前期研究发现由鱼腥草和牛蒡子两味中药构成的小复方具有改善糖尿病肾损伤的作用。本文采用水蒸气蒸馏法、水煎法和乙醇回流法分别获得复方鱼腥草不同提取物，并以其提取物作用于高糖条件下的小鼠肾小球系膜细胞。通过研究复方鱼腥草不同提取物对小鼠肾小球系膜细胞高糖条件下增殖的抑制作用和其对JAK2-、STAT3、SOCS-1和SOCS-3基因表达的影响，从而探讨复方鱼腥草提取物以SOCS对JAK/STAT信号通路进行负反馈调节作用，为复方鱼腥草防治糖尿病肾损害的机制研究提供体外实验依据。 方法: 1、将鱼腥草和牛蒡子粉混匀，以水蒸气蒸馏法提取复方鱼腥草挥发油组分;取回流液浓缩后真空干燥得到复方鱼腥草水提组分;药渣加75％乙醇水溶液回流2h后过滤浓缩后，真空干燥处理得到复方鱼腥草醇提组分。最后以挥发油组分、水提组分和醇提组分所得质量比配制得到复方鱼腥草总提取物。 2、对高糖条件培养下的小鼠肾小球系膜细胞分别加入1、2、4、8、16、32、64、128μg/mL复方鱼腥草挥发油组分、水提组分、醇提组分和总提取物，并以加等体积DMSO设为溶剂对照组和加10μmol/L AG490为阳性对照组。待药物作用24h，采用MTT法测定复方鱼腥草不同提取物对小鼠肾小球系膜细胞增殖的抑制作用，并计算各种提取物的半数抑制浓度。 3、以复方鱼腥草不同提取物各自IC50浓度，对高糖条件下的小鼠肾小球系膜细胞分别作用4、8、12、24、48h，收集细胞提取总RNA，以RT-PCR法检测复方鱼腥草提取物对小鼠肾小球系膜细胞中JAK2、STAT3、SOCS-1和SOCS-3mRNA相对表达量的影响。 结果: 1、MTT实验结果显示:复方鱼腥草不同提取物均对高糖条件下小鼠肾小球系膜细胞的增殖具有抑制作用;其抑制效果具有浓度依赖性;以GraphPad Prism5计算所得:复方鱼腥草挥发油提取物IC50浓度为124.9μg/mL;复方鱼腥草水提物IC50浓度为37.83μg/mL;复方鱼腥草醇提物IC50浓度为44.59μg/mL;复方鱼腥草总提取物IC50浓度为27.73μg/mL。 2、RT-PCR实验结果显示:复方鱼腥草不同提取物对高糖条件下的小鼠肾小球系膜细胞JAK2、STAT3、SOCS-1和SOCS-3mRNA的表达都有影响，不同组分的起效时间和持续效果有差异性;与溶剂对照组相比，复方鱼腥草提取物可以使SOCS-1和SOCS-3mRNA的表达显著上升，与此同时JAK2和STAT3mRNA的表达降低。 结论: 复方鱼腥草不同提取物对高糖条件下小鼠肾小球系膜细胞增殖有明显的抑制效果，从而对糖尿病肾损害有改善作用，其效果是通过增加SOCS-1、SOCS-3的基因表达和抑制JAK2、STAT3的基因表达而实现的。因此，复方鱼腥草提取物可能通过SOCS负反馈调节JAK/STAT信号通路相关基因表达，从而起到减轻糖尿病肾损害的作用。