论文部分内容阅读
目的:探讨C/EBPβ基因在新疆维吾尔族妇女子宫颈鳞癌组织中转录和翻译水平的表达及临床意义,研究C/EBPβ基因对子宫颈癌HeLa细胞生长、凋亡的影响,为预防和治疗该肿瘤奠定基础。方法:收集喀什地区人民医院2008年1月至2009年4月石蜡包埋标本172例,其中慢性子宫颈炎组织82例,子宫颈鳞癌组织90例,采用免疫组织化学(S-P法)检测C/EBPβ基因在子宫颈组织中的蛋白质表达水平。应用实时定量逆转录PCR实验检测5例子宫颈鳞癌组织及相应子宫颈癌旁组织中C/EBPβ基因mRNA表达水平。构建C/EBPβpcDNA3.1真核表达重组载体通过脂质体转染入子宫颈癌HeLa细胞,采用MTT法观察细胞存活状况及利用Annexin-Ⅴ/PI双染流式细胞法检测C/EBPβ基因对子宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响。结果:(1)C/EBPβ基因蛋白质在维吾尔族子宫颈鳞癌组织强阳性表达百分比为26.3%(15/57)与维吾尔族慢性子宫颈炎组织中的C/EBPβ蛋白质强阳性表达百分比为28.8%(13/45)无显著性差异(P>0.05)。C/EBPβ蛋白质在汉族族子宫颈鳞癌组织强阳性表达百分比为16.2%(6/37)与汉族慢性子宫颈炎组织中的C/EBPβ蛋白质强阳性表达百分比为28.8%(5/33)有显著性差异(P<0.05)。(2)通过卡方检验,表明维吾尔族、汉族妇女子宫颈鳞癌病理分级与C/EBPβ基因表达均有显著性差异,P<0.05,Spearman秩相关系数r维=0.409,r汉=0.438,表明宫颈鳞癌病理分级与C/EBPβ基因表达呈正相关。(3)通过卡方检验,表明维吾尔族妇女子宫颈鳞癌临床分期与C/EBPβ基因表达有关。Spearman秩相关系数r=-0.429,表明宫颈鳞癌临床分期与C/EBPβ基因表达呈负相关,而汉族无差异。(4)5例子宫颈鳞癌患者组织中C/EBPβ基因的mRNA表达水平的最高值是1.18,最低值是0.52,平均表达水平为0.84±0.21,而5例相对应的癌旁组织中mRNA的表达水平最高值为4.65,最低值为0.93,平均表达水平为2.16±1.30。经方差齐性检验,方差组间不齐,进行近似t检验,t=-3.884,p=0.002,表明子宫颈癌患者组织与正常子宫颈组织C/EBPβ的mRNA表达水平之间具有显著性差异。(5)成功的构建了C/EBPβpcDNA3.1重组载体,转染入HeLa细胞,转染后HeLa细胞:a.激光共聚焦结果显示:重组质粒组荧光蛋白表达含量明显高于对照组及空载体组,而对照组及空载体组蛋白表达无差异。b.免疫组化结果显示:重组质粒组蛋白表达明显高于对照组及空载体组,而对照组及空载体组蛋白表达无显著差异。c. MTT结果显示重组质粒组抑制率均明显低于空载体组及未转染HeLa细胞组,而后两组无显著差异。d. AnnexinV/PI双色流式细胞仪检测表明,重组C/EBPβ基因pcDNA3.1表达载体组的HeLa细胞凋亡水平明显高于空载体组和未转染HeLa细胞组,有显著性差异。结论:C/EBPβ基因在新疆维吾尔族子宫颈癌组织mRNA及蛋白质表达水平均降低,可能是潜在的抑癌基因;C/EBPβ基因可以抑制子宫颈癌HeLa细胞的生长,促进HeLa细胞凋亡。