【摘 要】
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发酵乳作为一种长寿食品一直备受关注。瑞士乳杆菌作为一种益生菌,其分解酪蛋白产生多肽Gln-Glu-Pro-Val-Leu（QEPVL）。QEPVL进一步经过胃肠道消化产生Gln-Glu-Pro-Val（QEPV）。前期研究表明,生物活性肽QEPV具有良好的免疫调节等功能。本文包含了多肽QEPV的生物活性和体内外检测等内容。第一、利用PERL语言解析瑞士乳杆菌的基因,发现瑞士乳杆菌有三个基因可以合成
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发酵乳作为一种长寿食品一直备受关注。瑞士乳杆菌作为一种益生菌,其分解酪蛋白产生多肽Gln-Glu-Pro-Val-Leu（QEPVL）。QEPVL进一步经过胃肠道消化产生Gln-Glu-Pro-Val（QEPV）。前期研究表明,生物活性肽QEPV具有良好的免疫调节等功能。本文包含了多肽QEPV的生物活性和体内外检测等内容。第一、利用PERL语言解析瑞士乳杆菌的基因,发现瑞士乳杆菌有三个基因可以合成含有QEPV片段的蛋白。第二、本文探究了流式细胞术和高效液相色谱质谱联用在多肽QEPV定量和定性研究的方法。用5-羧基荧光素（FAM）标记的多肽QEPV和荧FAM标记的多肽Asp-Glu-Leu-Gln（DELQ）分别培养菌种,菌种经过三次洗涤后用流式细胞仪检测,结果表明用FAM-QEPV和FAM-DELQ培养的菌种体内荧光强度明显增强,并且用FAM-QEPV组菌体内荧光强度高于FAM-DELQ组,说明菌体吸收了FAM-QEPV。第三、色谱柱HILIC柱对多肽QEPV具有良好的分离效果,本文确认了超高压液相色谱-三重四级杆质谱（U3Q）检测多肽QEPV的条件,并优化了U3Q在菌体、血液中检测多肽QEPV的前处理条件。以300 mg/kg的剂量,通过灌胃和腹腔注射分别给予BALB\C小鼠多肽,利用U3Q方法检测30到120 min内小鼠血清中多肽的含量。发现腹腔注射组小鼠对多肽的吸收性较高,在给肽60 min后小鼠血清中多肽QEPV含量下降;灌胃组小鼠对多肽的吸收较低,在30 min后小鼠血清中多肽含量开始下降。第四、本实验探索了瑞士乳杆菌和嗜热链球菌对多肽QEPV的吸收和利用。结果表明,瑞士乳杆菌和嗜热链球菌体内均含有微量的多肽QEPV,并且多肽QEPV能够被瑞士乳杆菌和嗜热链球菌吸收。分别以0.5、1.0、2.0 mg/m L的多肽QEPV培养对数生长期的嗜热链球菌,培养4 h后用U3Q方法检测嗜热链球菌体内多肽QEPV的含量,结果表明0.5、1.0、2.0浓度下嗜热链球菌体内含有127.09、147.82、348.63 ng/m L的多肽QEPV。分别用0.00、0.10、0.25、0.50、1.00 mg/m L的多肽QEPV培养瑞士乳杆菌和嗜热链球菌,发现0.5 mg/m L的多肽QEPV能够促进瑞士乳杆菌和嗜热链球菌的增殖和发酵,1.00 mg/m L的QEPV抑制瑞士乳杆菌和嗜热链球菌的增殖和发酵,表明适量的多肽QEPV对益生菌的生长有促进作用。
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