近年来,人畜共患疾病数量持续增加,食物中毒事件频发,病原菌快速检测技术成为人们生命安全与疫病防治的重要保障。现有的病原菌检测方法,如分离培养法、免疫学分析和分子微生物检测等方法在食品卫生以及临床医学等领域有着广泛应用。但这些方法均存在着一些不足,如检测周期长、操作繁琐以及成本高等。本论文以沙门氏菌为研究对象,提出一种基于焦磷酸分析的病原菌快速检测策略,针对病原菌特定基因片段设计扩增引物,将提取样本中的核酸分子进行体外核酸扩增(PCR)反应,通过直接分析PCR产物中焦磷酸,或者获取单链PCR产物延伸的焦磷酸产生化学发光信号来检测样本中是否存在特定的病原菌及其含量。在证实PCR反应扩增副产物焦磷酸量与初始DNA模板含量具有相关性的基础上,我们提出的基于焦磷酸分析病原菌快速检测技术包括两个步骤:首先,提取样本中的核酸分子,进行病原菌特定片段的PCR反应,运用焦磷酸化学发光测序技术的原理,将PCR扩增过程中产生的副产物焦磷酸在ATP硫酸化酶和荧光素酶的作用下转换为可见光,并依据可见光的信号强度与焦磷酸量来推知PCR初始DNA模板含量。即通过直接分析PCR产物中焦磷酸的光化学信号,实现对病原菌的快速检测。实验结果表明,通过对沙门氏菌inv A基因的特征扩增,该方法的检测限为104个拷贝数;对扬州家禽研究所提供的25份鸡蛋样本和25分鸡肉样本进行沙门氏菌检测,其阳性检出率的结果与研究所通过分离培养法获得的结果一致率为92%。其次,通过引入生物素修饰的引物进行PCR扩增反应,获取单链PCR产物,将单链PCR产物作为DNA模板,检测杂交引物在四个核苷酸共同参与聚合反应产生的焦磷酸,实现对PCR产物的检测。实验结果表明,该方法的检测限为10拷贝数;对采用直接测量PCR产物中焦磷酸的未检出阳性的样本进行分析,结果表明采用单链PCR产物衍生的焦磷酸检测方法可以检测含沙门氏菌拷贝数更低的食品样本。这种基于焦磷酸分析的病原菌检测策略具有检测用时短、操作简便、成本低以及灵敏度高等优势,可应用于多个领域的病原菌的快速检测。