新生大鼠缺氧缺血性脑病血清UCH-L1蛋白表达水平的实验研究

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目的:本实验通过制备7日龄SD大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic braindamage,HIBD)模型,对血清中UCH-L1蛋白的浓度进行检测,探讨(1)血清UCH-L1蛋白在新生SD大鼠缺氧缺血性脑病早期诊断中的价值。(2)血清UCH-L1蛋白水平与脑损伤严重程度的关系,为临床新生儿缺氧缺血性脑病的早期诊断和脑损伤评估提供实验依据。方法:(1)7日龄SD大鼠168只,随机分为3组:空白对照组,假手术组及HIBD模型组,每一组56只;HIBD组又随机分为7个亚组:6h组、12h组、24h组、48h组、72h组、96h组及7d组,每亚组8只。HIBD模型组采用改良Rice法制备HIBD模型。空白对照组及假手术组组内分组同HIBD组。(2)实验前后分别观察运动行为学变化、行改良神经功能缺失评分。(3)HIBD组于6h时全部先行取血一次,然后各组再按照相同时间点取血,留取脑组织,观察脑组织形态学变化及脑组织病理学改变(HE染色)。(4)采用ELISA法(双抗夹心法)检测血清中UCH-L1表达水平的变化。结果:(1)运动行为学观察空白对照组及假手术组无异常表现;HIBD组在缺氧过程中出现严重的异常表现。(2)改良神经功能缺失评分空白对照组及假手术组评分均为0;HIBD组在建模后评分均出现不同程度的变化:其中轻度损伤4.78±1.39(17只),中度损伤9.36±1.92(25只),重度损伤14.63±1.41(14只)。(3)脑组织大体形态学观察空白对照组及假手术组脑组织外观正常。HIBD组建模后脑组织出现不同程度的水肿、液化、坏死改变。(4)脑组织HE染色镜下观察空白对照组及假手术组神经元细胞未见异常。HIBD组建模后各时间点左侧脑组织HE染色镜下观察神经元细胞出现变性、坏死、凋亡,同时伴有神经胶质细胞的增生。(5)血清UCH-L1蛋白水平各时间点统计学分析空白对照组组间比较血清UCH-L1蛋白浓度差异,P>0.05,无统计学意义。假手术组组间比较血清UCH-L1蛋白浓度差异,P>0.05,无统计学意义。假手术组与空白对照组比较各时间点血清UCH-L1蛋白浓度,P>0.05,无统计学意义,表明假手术组UCH-L1蛋白浓度表达稳定,未受手术因素的影响;HIBD组分别与假手术组和空白对照组各时间点比较血清UCH-L1蛋白浓度,P<0.05,有统计学意义,说明HIBD后6h血清UCH-L1蛋白表达水平明显增高。HIBD组血清UCH-L1蛋白浓度在6h时随时间逐渐升高,至48h到达峰值后,又随时间逐渐下降。(6)HIBD组神经功能缺失评分与血清UCH-L1蛋白水平分析重度损伤UCH-L1蛋白浓度明显高于轻度损伤和中度损伤,中度损伤UCH-L1蛋白浓度高于轻度损伤,且差异均有统计学差异(P<0.05);血清UCHL1蛋白与神经功能缺失评分相关。结论:(1)新生7日龄SD大鼠缺氧缺血性脑病模型建立成功。(2) UCH-L1蛋白可能是一种新的生物标志物,可用于新生SD大鼠缺氧缺血性脑病的早期诊断(6h)。(3)新生大鼠缺氧缺血性脑病血清UCH-L1蛋白浓度在6h时随时间逐渐升高,至48h到达峰值后,随时间逐渐下降。(4)新生大鼠缺氧缺血性脑病血清UCHL1蛋白与脑损伤的严重程度呈正相关,可能作为评估脑损伤的指标。
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