【摘 要】
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为了解华东地区规模化猪场常见的猪呼吸道病原菌对临床常用抗菌药物的耐药状况,本研究在华东地区多个规模化猪场收集临床病料样品,进行猪链球菌、副猪嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌及支气管败血波氏杆菌等呼吸道疾病相关的细菌性病原的分离鉴定及其对12种临床常用抗菌药物的最小抑菌浓度（MIC）测定。在此基础上,通过全基因组测序和生物信息学分析等技术,解析多杀性巴氏杆菌对氟苯尼考的耐药机制和传播机理。
【基金项目】
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上海市科技兴农技术创新项目“猪呼吸道病原菌及其敏感药物的显色可视化现场检测技术开发与应用”（项目编号:沪农科创字（2022）第2022-02-08-00-12-F01100号）课题主持人:李蓓蓓研究员（中国农业科学院上海兽医研究所）； 国家自然科学基金-地区基金项目“猪源喹诺酮类耐药沙门氏菌产生机制与适应性研究”（项目编号:31860714）课题主持人:夏利宁教授
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为了解华东地区规模化猪场常见的猪呼吸道病原菌对临床常用抗菌药物的耐药状况,本研究在华东地区多个规模化猪场收集临床病料样品,进行猪链球菌、副猪嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌及支气管败血波氏杆菌等呼吸道疾病相关的细菌性病原的分离鉴定及其对12种临床常用抗菌药物的最小抑菌浓度（MIC）测定。在此基础上,通过全基因组测序和生物信息学分析等技术,解析多杀性巴氏杆菌对氟苯尼考的耐药机制和传播机理。试验结果如下:从华东地区多个规模化猪场共分离到猪呼吸道病原菌218株,其中猪链球菌92株,副猪嗜血杆菌67株,多杀性巴氏杆菌31株,胸膜肺炎放线杆菌19株,支气管败血波氏杆菌9株。MIC测试结果显示,除支气管败血波氏杆菌外,所有菌株对头孢噻呋100.00%敏感;猪链球菌对多西环素、替米考星和阿奇霉素的耐药率在80.00%以上,但对阿莫西林和阿莫西林-克拉维酸耐药率较低;副猪嗜血杆菌对甲氧苄啶-磺胺甲噁唑（46.27%）和恩诺沙星（44.78%）有着较高耐药率,对氟苯尼考和泰妙菌素则100.00%敏感;多杀性巴氏杆菌对甲氧苄啶-磺胺甲噁唑（61.29%）耐药率较高,对氟苯尼考的耐药率为25.81%,对其余抗菌药物耐药率均低于15.00%;胸膜肺炎放线杆菌主要表现为对多西环素（89.48%）、氟苯尼考（47.37%）和大观霉素（42.11%）耐药,对其他9种抗菌药物的耐药率均较低;支气管败血波氏杆菌对庆大霉素、阿奇霉素、恩诺沙星和多西环素的MIC50较低,说明其对这几种药物较为敏感。多药耐药结果显示五种猪呼吸道病原菌均有2药及以上多药耐药菌株存在,其中有1株猪链球菌对7种抗菌药物耐药。PFGE分子分型显示,分离的31株多杀性巴氏杆菌可分为14个PFGE谱型,菌株相对集中于J簇、A簇、G簇和H簇,占61.29%;利用PCR检测8株多杀性巴氏杆菌的氟苯尼考耐药基因,结果均为flo R阳性;选取J簇和A簇中flo R阳性代表菌株进行全基因组测序以解析flo R传播载体特征。生物信息学分析表明,flo R基因分别位于大小为5 279 bp和6 327 bp的两个质粒上,命名为p PMF1和p PMF2。序列比对分析显示,与p PMF1和p PMF2有相同骨架和较高序列同源性的质粒大多源自动物呼吸道病原菌,这也提示具有该类结构的小型质粒在巴氏杆菌科病原菌的耐药基因传播扩散中起到重要作用。结论:华东地区规模化猪场猪呼吸道病原菌以猪链球菌和副猪嗜血杆菌为主;五种病原菌对临床常用抗菌药物的耐药性比较严重,且均有多药耐药菌株存在;多杀性巴氏杆菌对氟苯尼考的耐药均为携带flo R基因的小型质粒介导,且有流行优势菌株携带flo R质粒。建议根据药敏结果,选用合适的抗菌药物治疗猪呼吸道细菌性疾病,并加强呼吸道病原菌流行病学调查和耐药性监测,以提升抗菌药物在猪场中的使用效率,避免耐药性的扩散传播。
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