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目的：许多研究显示，HHcy是心血管疾病重要且独立的危险因子，而糖尿病患者的大、微血管并发症发生率极高，本研究旨在探讨tHcy及其相关基因多态性与糖尿病及其并发症的发生是否相关。 方法：建立测定血浆tHcy浓度的rHPLC法，检测84例健康人和266例2TDM患者(分为NDC、DN、DR和DC四组)的血浆tHcy和叶酸水平，应用PCR-RFLP法检测MTHFR677CT及1298AC基因多态性，比较各组间tHcy、叶酸水平、MTHFR677CT及1298AC基因型分布和等位基因频率。 结果：1．利用rHPLC法检测血浆tHcy浓度，所有样品均有较好的分离效果。应用硼氢化钠作还原剂和磷酸盐作流动相的方法检测Hcy浓度，其最小检测限为1.0μM，批间差异4.48％，批内差异4.20％，回收率为98.62±5.05％； 2．DM并发症各组的血浆tHcy水平(DN 14.335±10.491μmol／L、DR14.197±7.504μmol／L、DC 18.921±8.710μmol／L)高于CON或NDC组(9.870±2.249μmol／L和10.004±4.728μmol／L)(P＜0.001)，且叶酸水平较低(P＜0.001)； 3．DN、DR、DC各组HHcy发生率高于CON或NDC组(35.9％、43.2％、65.2％ vs1.2％、17.4％，P＜0.01)； 4．MTHFR677TT基因型在DN、DR及DC组分别为28.1％、22.7％和35.9％，显著高于CON及NDC组14.3％和18.5％(P＜0.001)，T等位基因频率亦显著高于CON及NDC(45.3％、40.9％、51.5％ vs 29.2％、32.1％，P＜0.001；tHcy水平，突变纯合子(17.801±10.059μmol／L)及突变杂合子 (15.575±7.132μmol／L) 高于野生型(8.692±2.956μmol／L)(P＜0.05)，叶酸相反； 5．各组间MTHFR1298A→C 基因型分布及等位基因频率、突变型与野生型thcy及叶酸水平均无显著性差异(P＞0.05)； 天津医科大学申请硕士学位论文 6.两种基因型联合分析，有MTHFR677C一T突变者，tHcy浓度高于 无该突变者(p<0.01)，未发现677TT/1298AC和677TT/1298CC两种 基因型个体存在; 7.影响血浆tHcy浓度的因素包括血浆叶酸水平、MTHFR677C~T基 因型及年龄(卜0.718，扩=0.516，P=0.000); 8.血浆tHey水平对DN、DR、DC的OR值(95%Cl)分别为1 .1 09(1 .019 一1 .207)伊=0.017)、1.201(1.051一1.372)(P=0.007)、1.678(1.342一2.099) (P=0 .000)。结论:所建立的rHPLc法精确度高、重复性好，适用于临床实验室对Hcy 的常规定量测定。叶酸和MTHFR基因型是血浆tHcy水平的主要影响 因素。HHcy是DN、DR、DC的危险因子，及早预防和纠正HHcy可能 对减少糖尿病并发症的发生具有重要意义，补充叶酸有望达到此目的。