【摘 要】
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稻瘟病由病原真菌稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)侵染引起,是水稻三大病害之一,对水稻中抗稻瘟病基因功能的分析有助于揭示水稻抗稻瘟病的机制,加快水稻抗病育种进程。本实验
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稻瘟病由病原真菌稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)侵染引起,是水稻三大病害之一,对水稻中抗稻瘟病基因功能的分析有助于揭示水稻抗稻瘟病的机制,加快水稻抗病育种进程。本实验室前期通过GWAS分析得到的一个与抗稻瘟病相关、编码氧化还原酶的基因pi-G3,本文对该基因的功能进行了初步研究。分别构建了该基因CRISPR/Cas9敲除载体和超表达载体,通过农杆菌介导转化获得转基因植株。对获得的转基因植株利用打孔接种和ROS测定等实验进行抗病表型及相关生理生化指标鉴定,同时对该基因进行亚细胞定位。初步证明了pi-G3参与水稻抗稻瘟病的功能。具体研究结果如下:1、设计pi-G3基因编辑靶点构建CRISPR/Cas9载体pYB02-pi-G3,同时PCR扩增pi-G3 CDS全长构建超表达载体pROXs-HA-pi-G3,通过农杆菌转化获得转基因植株。2、对转基因植株进行普通PCR测序以及荧光定量PCR鉴定pi-G3基因型及转录水平变化,获得CRISPR突变体pi-G3-7-4,pi-G3-5-5;野生型:pi-G3-9-1;超表达植株:pi-G3-12-13,pi-G3-12-5。3、稻瘟病抗性鉴定及ROS测定结果表明基因pi-G3与水稻稻瘟病抗性相关;对pi-G3的CRISPR突变体进行常规农艺性状调查发现敲除该基因之后对其常规表型没有较大影响。4、通过对pi-G3进行亚细胞定位,在激光共聚焦显微镜下观察到该基因定位于水稻叶绿体中。5、原核表达实验结果说明pi-G3在添加IPTG条件下被诱导表达,为下一步进行该基因的蛋白水平实验奠定了基础。本研究通过GWAS挖掘出一个新的与水稻抗稻瘟病相关基因pi-G3,并对该基因的抗性表型以及常规表型进行了深入分析,为水稻抗稻瘟病育种提供了新资源。
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