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法尼醇受体（Farnesoid X Receptor,FXR）是维持胆汁酸肝肠循环和稳态平衡的重要核受体之一,当胆汁酸的合成或分泌受到干扰会导致肝内滞留毒性胆汁酸,这些毒性胆汁酸会造成肝损伤。大花红景天（Rhodiola crenulata[HK.f.et Thoms.]H.Ohba）为《中国药典》（2015版）收载的红景天药材正品基源植物,具有益气活血,通脉平喘的功效,现代药理学研究发现其具有肝保护、神经保护、抗肿瘤等作用。文献报道红景天可改善因胆汁排泄受阻而引起的梗阻性黄疸性肝损伤,但其是否可通过激活FXR来调节胆汁酸从而发挥抗胆汁淤积作用尚不明确。因此,为明确大花红景天的活性成分是否具有抗肝内胆汁淤积作用及其作用机制,本文开展了以下三方面的工作:1.大花红景天活性成分研究;2.活性成分抗肝内胆汁淤积体内药效学及作用机制研究;3.活性成分激活FXR的体外作用机制研究。1.大花红景天中FXR激动作用的活性成分研究。（1）采用硅胶柱色谱、Sephedex LH-20、半制备HPLC、制备TLC等手段进行化学成分分离,通过~1H-NMR、13C-NMR等技术鉴定了12个化合物,分别是大花红天素（crenulatin,QSY-1）,酪醇（tyrosol,QSY-2）,对甲酚（p-cresol,QSY-3）,尿苷（uridine,QSY-4）,红景天苷（salidroside,QSY-5）,山奈酚（kaempferol,QSY-6）,8,8’-二羟基松脂素（prinsepiol,QSY-7）,咖啡酸（caffeic acid,QSY-8）,2,6-二甲氧基苯乙酮-4-O-β-D-葡萄糖（2,6-dimethoxyacetophenone-4-O-β-D-glucose,QSY-9）,对羟基苯甲酸（p-hydroxybenzoic acid,QSY-10）,香叶基1-O-α-L-阿拉伯糖基（1→6）-β-D-葡萄糖（kenposide A,QSY-11）,4,5-二咖啡酰喹啉乙酯（ethyl 4,5-dicaffeoylquinate,QSY-12）。其中QSY-3,7,12为首次从红景天属植物中分离得到,QSY-9为首次从该植物中分离得到。（2）建立由固甾酮诱导FXR表达抑制的L-02细胞模型,利用免疫荧光技术对分离到的12个化合物进行活性筛选。结果显示酪醇,红景天苷,山奈酚,8,8’-二羟基松脂素和2,6-二甲氧基苯乙酮-4-O-β-D-葡萄糖可显著上调固甾酮诱导的L-02细胞FXR表达水平,表明以上化合物可能具有通过激活FXR调节胆汁酸稳态的潜在作用。其中活性最好的红景天苷也是大花红景天中的主要活性成分,因此选择该化合物进行后续研究。2.红景天苷改善大鼠肝内胆汁淤积的药效学及作用机制研究。以α-萘异硫氰酸酯（alpha-naphthylisothi,ANIT）诱导建立大鼠肝内胆汁淤积模型。实验分为6组:正常组,模型组（60 mg/kg ANIT）,阳性对照组（100 mg/kg UDCA）,红景天苷低、中、高剂量组（分别是10,30和60 mg/kg）。阳性对照组和红景天苷组大鼠灌胃给药7天,第5日除正常对照组外,其余各组大鼠一次性灌胃ANIT橄榄油溶液（60 mg/kg）造模。（1）通过测量胆汁流速,检测血清生化指标,观察肝脏组织病理切片和通过western blot法检测炎症因子来评价红景天苷治疗大鼠肝内胆汁淤积作用。结果显示通过红景天苷给药后,与模型组相比,胆汁流量增加,血清生化指标ALT、ALP、AST、GGT,TBIL、DBIL、TBA均下降,肝组织病理损伤减弱,促炎因子TNF-α,IL-1β,IL-6下调,抗炎因子IL-10上调,表明红景天苷具有显著抗大鼠肝内胆汁淤积的作用。（2）通过western blot检测FXR及其下游基因的蛋白表达研究红景天苷抗大鼠肝内胆汁淤积的机制。红景天苷能上调FXR、SHP1、SHP2、MRP2、BSEP和NTCP的表达,下调CYP7A1和CYP27A1的表达,表明红景天苷抗肝内胆汁淤积作用可能是通过激活FXR来调节胆汁酸合成和转运。3.红景天苷基于FXR的体外作用机制研究。对不同处理的L-02细胞分别给予红景天苷低、中、高剂量（20,40和80μmol/L）及阳性药GW4064（6μmol/L）。利用免疫荧光技术、反转录聚合酶链反应技术（reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR）和western blot法检测FXR及下游基因的表达。（1）红景天苷对固甾酮抑制FXR表达后FXR和下游基因的影响。结果显示红景天苷能够逆转固甾酮对FXR的抑制作用,并上调SHP1、SHP2、MRP2、BSEP和NTCP荧光蛋白的表达,下调CYP7A1和CYP27A1荧光蛋白的表达,这一结果与红景天苷在抗大鼠胆汁淤积时发挥的作用是一致的。（2）红景天苷对si RNA沉默FXR表达后FXR和下游基因的影响。当FXR的表达被沉默后,下游基因的表达也随之受到影响。红景天苷可以干扰FXR的表达使之上调,在m RNA和蛋白水平使SHP1、SHP2、MRP2、BSEP和NTCP的表达增加,而CYP7A1和CYP27A1的表达降低。（3）红景天苷对过表达质粒调节FXR高表达后FXR及下游基因的影响。红景天苷可以进一步促进质粒对FXR的激活效应,对下游胆汁酸合成与转运相关基因的调节作用,是基于FXR来参与的。综上,本研究从大花红景天中分离鉴定了12个化合物,通过免疫荧光技术筛选到5个化合物具有FXR激活作用,进一步选取红景天苷进行深入研究,结果表明,红景天苷具有显著的抗肝内胆汁淤积活性,其机制是通过激活FXR来调节胆汁酸的合成和转运。本研究为开发基于FXR靶点的药物及其先导化合物,及为该药材的资源进一步利用奠定了基础。