【摘 要】
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目的:细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）作为一种生物材料可以促进鼠趾的组织修复和再生,但ECM粉剂对鼠趾再生的效果、组织形态学变化特征和规律尚未明确。本文旨在研究ECM粉剂诱导鼠趾再生的效果及其对骨形态的改变和M2型巨噬细胞（Macrophages,M（?））标志物CD206阳性细胞出现的部位、数量和时间,为人指损伤的临床治疗提供理论依据及参考。方法:1.制备ECM:通
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目的:细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）作为一种生物材料可以促进鼠趾的组织修复和再生,但ECM粉剂对鼠趾再生的效果、组织形态学变化特征和规律尚未明确。本文旨在研究ECM粉剂诱导鼠趾再生的效果及其对骨形态的改变和M2型巨噬细胞（Macrophages,M（?））标志物CD206阳性细胞出现的部位、数量和时间,为人指损伤的临床治疗提供理论依据及参考。方法:1.制备ECM:通过改进和优化脱细胞法制备猪膀胱来源的ECM粉剂,并通过HE染色对其进行表征,通过细胞毒性检测、急性全身毒性实验和肝肾毒性实验对ECM的生物安全性进行检测;2.建模及分组:使用6～8周龄性成熟的雄性昆明小白鼠,在第二趾骨（Phalange2,P2）截断分别建立保留软组织断趾模型和不保留软组织断趾模型。实验动物随机分为ECM治疗组（将ECM加载于小鼠断趾末端）和空白对照组。3.鼠趾再生的形态学评价:分别在鼠趾截断后的第1～50天（每天）、90天和100天取下小鼠的脚趾制作石蜡组织切片并染色,（1）通过HE染色观察断趾的炎性细胞浸润、血管分化和间充质细胞的募集等情况;（2）通过甲苯胺蓝染色评价断趾处软骨的生长情况;（3）通过Mallory三色染色分析细胞核、红细胞、肌纤维和胶原纤维的生长等情况;（4）通过免疫组织化学染色观察M2型巨噬细胞标志物CD206的表达情况。结果:1.ECM的表征实验结果显示,制备的ECM细胞核几乎完全除去,符合脱细胞标准,并且无细胞毒性、无全身毒性和肝肾毒性。2.保留软组织断趾的ECM治疗组的软骨生成量与对照组相比无显著差异。3.在不保留软组织的断趾模型中显示:（1）HE染色的结果显示,在截肢后3天（3Days post amputation,3 DPA）伤口开始沿着残端分化的表皮结构和截断的肌腱收缩。与对照组相比,在5 DPA开始有少量的间充质细胞聚集在断趾末端的真皮和骨骼残端内;在7 DPA截肢残端有血管化的纤维结缔组织形成;在22 DPA断趾末端的肉芽组织逐渐成熟,炎性细胞减少并逐渐消失,毛细血管减少,其中胶原纤维排列与断趾末端表面平行;（2）甲苯胺蓝染色的结果显示在8 DPA软骨的生成量开始逐渐增加,且ECM组多于对照组,软骨生成分布的部位主要在骨的外侧面临近骨膜的位置;在12DPA软骨生成量基本达到峰值,在21 DPA断端的软骨内骨化反应开始出现,并且许多软骨分化为编织骨;（3）Mallory三色染色结果显示,在12DPA时骨的外侧面胶原纤维生成较活跃,在22 DPA肌纤维的生成量开始增多,在38 DPA骨塞在鼠趾残端形成;（4）免疫组织化学的结果显示,CD206阳性细胞在14 DPA左右出现量明显增多,之后出现量又开始逐渐下降,在21 DPA左右恢复至初始水平。结论:在不保留软组织的断趾模型中,猪膀胱来源的ECM粉剂可以促进断趾的再生,再生过程中软骨的生成和CD206阳性染色细胞的出现在位置和时间上存在相对一致性。
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