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目的：
以2型糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)大鼠为实验对象，对DN大鼠分别以肾衰方不同剂量进行干预，并通过肾脏组织病理观察、免疫组化共染CD68、CD206、MCP-1、ICAM-1、FN、coll-4及West-Blotting检测ICAM-1、Fibronecin、MCP-1的蛋白表达，在进一步证实。肾衰方对DN治疗作用的基础上，研究肾衰方是否通过调控DN大鼠肾脏炎症反应和延缓其纤维化进展而发挥作用。
方法：
将8周龄52只雄性SD大鼠随机分为正常对照组4只，2型糖尿病(Type2diabetic mellitus，T2DM)模型组48只。普通饲料适应性喂养一周后，T2DM模型组大鼠转为高糖高脂饲料喂养4周，正常对照组继以普通饲料喂养4周。而后，T2DM模型组大鼠以35mg/kg剂量腹腔注射链脲佐菌素-柠檬酸溶液，NC组大鼠按等剂量腹腔注射柠檬酸溶液。72h后，对T2DM模型组大鼠测尾尖随机血糖，取随机血糖＞16.7mmol/L者为T2DM造模成功。T2DM成模4周后，代谢笼收集大鼠24小时尿液，取24小时尿蛋白＞30mg者为DN造模成功。将DN大鼠随机再分为DN模型对照组(n=10);肾衰方低剂量组(低剂量组)(n=7);肾衰方中剂量组(中剂量组)(n=7);肾衰方高剂量组(高剂量组)(n=7);厄贝沙坦对照组(厄贝沙坦组)(n=7)。低剂量组每日以肾衰方1.3g/100g体重灌胃治疗，中剂量组每日以肾衰方2.6g/100g体重灌胃治疗，高剂量组每日以肾衰方5.2g/100g体重灌胃治疗，厄贝沙坦组每日以厄贝沙坦1.38g/100g体重灌胃治疗，DN模型对照组组、正常对照组每日以生理盐水1.3g/100g体重灌胃。实验过程中观察大鼠体重、饮水量及尿量、尿蛋白、尿微量白蛋白、血糖等一般情况。治疗24天，最后一次记录大鼠体重、24h尿量，测定尿蛋白、尿微量白蛋白、血糖后处死各组大鼠。HE染色观察肾脏组织病理改变;肾脏组织免疫组化检测CD206、CD68、MCP-1、ICAM-1、Fibronecin、CollagenⅣ的表达;West-Blotting方法检测大鼠肾脏MCP-1、ICAM-1、Fibronecin的蛋白表达。
结果：
1.体重：治疗前和治疗后，与正常对照组相比，DN模型对照组及各治疗组体重明显减轻(P均＜0.01)。
2.血糖：治疗前和治疗后，DN模型对照组和各治疗组血糖监测结果皆相近，均明显高于正常对照组(p均＜0.01)。
3.24h尿量：治疗前，与正常对照组相比，DN模掣组及各治疗组24h尿量明显增多(P均＜0.01)。治疗后，与DN模型对照组相比，各治疗组24h尿量明显减少(P均＜0.05和0.01)。
4.24h尿蛋白定量：治疗前，与正常对照组相比，DN模型对照组及各治疗组24h尿蛋白均明显增多(P均＜0.01)。治疗后，与DN模型对照组相比，肾衰方高剂量组、厄贝沙坦组24h尿蛋白明显减少(P均＜0.01)。
5.24h尿微量白蛋白：治疗前，与正常对照组相比，DN模型对照组与各治疗组24h尿微量白蛋白明显升高(P均＜0.01)。治疗后，与DN模型对照组相比，肾衰方高剂量组、厄贝沙坦组24h尿微量白蛋白明显减少(P均＜0.01)。
6.尿微量白蛋白/尿肌酐(ACR)：治疗前，与正常对照组对比，DN模型对照组与各治疗组ACR明显升高(P均＜0.01)。治疗后，各治疗组ACR升高幅度均低于DN模型对照组(p均＜0.01)，以肾衰方高剂量组和厄贝沙坦组最为明显(P均＜0.05)。
7.病理学改变：正常对照组大鼠肾小球体积不大，血管、基底膜无增生;DN模型对照组大鼠肾小球体积增大，毛细血管增生，球囊明显狭窄，肾小球血管基底膜轻度增生，远曲小管部分上皮细胞空泡变。各治疗组大鼠肾脏亦呈上述病理改变，但其改变程度明显轻于DN模型对照组，以肾衰方高剂量组和厄贝沙坦组病理改变程度最轻。
8.免疫组化：各组大鼠检测CD68、CD206及ICAM-1、FN、CollagenⅣ、MCP-1的表达发现，DN模型对照组阳性表达最明显，以肾衰方高剂量组和厄贝沙坦组阳性表达最轻(P均＜0.05)。
9.West-Blotting：各组大鼠检测MCP-1、ICAM-1、Fibronecin，MCP-1发现，DN模型对照组、低剂量组、中剂量组大鼠肾组织细胞MCP-1表达上调，高剂量组与厄贝沙坦组大鼠肾组织MCP-1表达下调(p均＜0.05);ICAM-1发现，DN模型对照组、低剂量组、中剂量组大鼠肾组织细胞ICAM-1表达上调，高剂量组与厄贝沙坦组大鼠肾组织ICAM-1表达下调(p均＜0.05);Fibronectin发现DN模型对照组、低剂量组大鼠肾组织细胞Fibronectin表达明显上调，中剂量组与高剂量组、厄贝沙坦组大鼠肾组织Fibronectin表达下调(p均＜0.05)。
结论：
1.肾衰方具有较明显减少尿量、尿微量白蛋白、尿蛋白的作用,且呈一定的剂量依赖关系。
2.肾衰方可以改善DN肾脏的病理学病变，此作用亦呈一定的剂量依赖关系。
3.巨噬细胞的参与、炎症和纤维化的发生发展是DN发生发展的重要因素，肾衰方可以延缓此发展过程。
4.肾衰方改善DN肾脏病理学病变和纤维化的作用很可能是通过减少巨噬细胞向M2分化而实现的。
5.肾衰方对DN大鼠无降糖作用。
以2型糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)大鼠为实验对象，对DN大鼠分别以肾衰方不同剂量进行干预，并通过肾脏组织病理观察、免疫组化共染CD68、CD206、MCP-1、ICAM-1、FN、coll-4及West-Blotting检测ICAM-1、Fibronecin、MCP-1的蛋白表达，在进一步证实。肾衰方对DN治疗作用的基础上，研究肾衰方是否通过调控DN大鼠肾脏炎症反应和延缓其纤维化进展而发挥作用。
方法：
将8周龄52只雄性SD大鼠随机分为正常对照组4只，2型糖尿病(Type2diabetic mellitus，T2DM)模型组48只。普通饲料适应性喂养一周后，T2DM模型组大鼠转为高糖高脂饲料喂养4周，正常对照组继以普通饲料喂养4周。而后，T2DM模型组大鼠以35mg/kg剂量腹腔注射链脲佐菌素-柠檬酸溶液，NC组大鼠按等剂量腹腔注射柠檬酸溶液。72h后，对T2DM模型组大鼠测尾尖随机血糖，取随机血糖＞16.7mmol/L者为T2DM造模成功。T2DM成模4周后，代谢笼收集大鼠24小时尿液，取24小时尿蛋白＞30mg者为DN造模成功。将DN大鼠随机再分为DN模型对照组(n=10);肾衰方低剂量组(低剂量组)(n=7);肾衰方中剂量组(中剂量组)(n=7);肾衰方高剂量组(高剂量组)(n=7);厄贝沙坦对照组(厄贝沙坦组)(n=7)。低剂量组每日以肾衰方1.3g/100g体重灌胃治疗，中剂量组每日以肾衰方2.6g/100g体重灌胃治疗，高剂量组每日以肾衰方5.2g/100g体重灌胃治疗，厄贝沙坦组每日以厄贝沙坦1.38g/100g体重灌胃治疗，DN模型对照组组、正常对照组每日以生理盐水1.3g/100g体重灌胃。实验过程中观察大鼠体重、饮水量及尿量、尿蛋白、尿微量白蛋白、血糖等一般情况。治疗24天，最后一次记录大鼠体重、24h尿量，测定尿蛋白、尿微量白蛋白、血糖后处死各组大鼠。HE染色观察肾脏组织病理改变;肾脏组织免疫组化检测CD206、CD68、MCP-1、ICAM-1、Fibronecin、CollagenⅣ的表达;West-Blotting方法检测大鼠肾脏MCP-1、ICAM-1、Fibronecin的蛋白表达。
结果：
1.体重：治疗前和治疗后，与正常对照组相比，DN模型对照组及各治疗组体重明显减轻(P均＜0.01)。
2.血糖：治疗前和治疗后，DN模型对照组和各治疗组血糖监测结果皆相近，均明显高于正常对照组(p均＜0.01)。
3.24h尿量：治疗前，与正常对照组相比，DN模掣组及各治疗组24h尿量明显增多(P均＜0.01)。治疗后，与DN模型对照组相比，各治疗组24h尿量明显减少(P均＜0.05和0.01)。
4.24h尿蛋白定量：治疗前，与正常对照组相比，DN模型对照组及各治疗组24h尿蛋白均明显增多(P均＜0.01)。治疗后，与DN模型对照组相比，肾衰方高剂量组、厄贝沙坦组24h尿蛋白明显减少(P均＜0.01)。
5.24h尿微量白蛋白：治疗前，与正常对照组相比，DN模型对照组与各治疗组24h尿微量白蛋白明显升高(P均＜0.01)。治疗后，与DN模型对照组相比，肾衰方高剂量组、厄贝沙坦组24h尿微量白蛋白明显减少(P均＜0.01)。
6.尿微量白蛋白/尿肌酐(ACR)：治疗前，与正常对照组对比，DN模型对照组与各治疗组ACR明显升高(P均＜0.01)。治疗后，各治疗组ACR升高幅度均低于DN模型对照组(p均＜0.01)，以肾衰方高剂量组和厄贝沙坦组最为明显(P均＜0.05)。
7.病理学改变：正常对照组大鼠肾小球体积不大，血管、基底膜无增生;DN模型对照组大鼠肾小球体积增大，毛细血管增生，球囊明显狭窄，肾小球血管基底膜轻度增生，远曲小管部分上皮细胞空泡变。各治疗组大鼠肾脏亦呈上述病理改变，但其改变程度明显轻于DN模型对照组，以肾衰方高剂量组和厄贝沙坦组病理改变程度最轻。
8.免疫组化：各组大鼠检测CD68、CD206及ICAM-1、FN、CollagenⅣ、MCP-1的表达发现，DN模型对照组阳性表达最明显，以肾衰方高剂量组和厄贝沙坦组阳性表达最轻(P均＜0.05)。
9.West-Blotting：各组大鼠检测MCP-1、ICAM-1、Fibronecin，MCP-1发现，DN模型对照组、低剂量组、中剂量组大鼠肾组织细胞MCP-1表达上调，高剂量组与厄贝沙坦组大鼠肾组织MCP-1表达下调(p均＜0.05);ICAM-1发现，DN模型对照组、低剂量组、中剂量组大鼠肾组织细胞ICAM-1表达上调，高剂量组与厄贝沙坦组大鼠肾组织ICAM-1表达下调(p均＜0.05);Fibronectin发现DN模型对照组、低剂量组大鼠肾组织细胞Fibronectin表达明显上调，中剂量组与高剂量组、厄贝沙坦组大鼠肾组织Fibronectin表达下调(p均＜0.05)。
结论：
1.肾衰方具有较明显减少尿量、尿微量白蛋白、尿蛋白的作用,且呈一定的剂量依赖关系。
2.肾衰方可以改善DN肾脏的病理学病变，此作用亦呈一定的剂量依赖关系。
3.巨噬细胞的参与、炎症和纤维化的发生发展是DN发生发展的重要因素，肾衰方可以延缓此发展过程。
4.肾衰方改善DN肾脏病理学病变和纤维化的作用很可能是通过减少巨噬细胞向M2分化而实现的。
5.肾衰方对DN大鼠无降糖作用。