[目 的]肺癌是全球癌症相关死亡的主要原因,但目前临床上应用的治疗手段疗效不佳,寻求有效的早期诊断及治疗的分子靶标对于肺癌防控有着重要的意义。选择性剪接作为前体mRNA成熟过程中一个重要的调控过程,极大的丰富了翻译蛋白质的种类,以保证人类复杂的生命活动在有限的编码基因数中正常进行。人类大约有超过95%的基因受到选择性剪接的调控,越来越多研究发现选择性剪接异常与人类疾病密切相关。前期发现剪接因子SRSF9在非小细胞肺癌中表达异常,本研究进一步检测剪接因子SRSF9在临床肺癌样本以及肺癌细胞系中的表达水平,并深入研究剪接因子SRSF9对肺癌细胞增殖以及侵袭等生物学功能影响的分子机制,旨在为肺癌的临床诊断及治疗提供新的思路。[方 法]1.本研究第一部分首先通过实时荧光定量PCR确定了剪接因子SRSF9在64例收集于昆明医科大学第三附属医院肺癌患者的癌组织及相对应的癌旁组织、肺癌细胞系A549、H1299及人胚肺二倍体细胞KMB17中的表达量;结合临床资料分析剪接因子SRSF9表达量与性别、年龄、病理类型等之间有无相关性。2.本研究第二部分通过慢病毒感染肺癌细胞系A549和H1299下调剪接因子SRSF9的表达后,通过平板克隆、Transwell体外侵袭等实验检测剪接因子SRSF9下调后对细胞增殖、侵袭等生物学功能的影响。3.本研究第三部分通过将两株肺癌细胞系A549和H1299经过检测验证成功下调剪接因子SRSF9后的mRNA样本进行全长转录组测序,探索剪接因子SRSF9在肺癌细胞中的作用机制。[结 果]1.剪接因子SRSF9mRNA水平在64例肺癌患者病理组织中癌组织的表达水平为(3.85×10-3,2.81×10-3)高于癌旁组织(3.05×10-3,1.35×10-3),p<0.01;剪接因子SRSF9mRNA水平在肺癌细胞系A549 中的表达量(7.1×10-3±2.96×10-4)、H1299 中的表达量(1.49×10-2±1.55×10-3)均高于在人胚肺二倍体细胞KMB17中的表达量(5.42×10-3±5.15×10-4),p<0.05;剪接因子SRSF9mRNA水平表达量与男女性别、年龄大小、肿瘤病理类型以及TNM分期等均无相关性。2.慢病毒感染肺癌细胞下调剪接因子SRFS9的表达后,平板克隆实验结果显示肺癌细胞A549下调SRSF9S实验组细胞集落形成数目(226±17.47)低于对照组(426±22.19),H1299细胞下调SRSF9实验组细胞集落形成数目(92±15.14)低于对照组(369±12.58),结果有统计学差异(p<0.000);Transwell体外侵袭实验结果显示肺癌细胞A549下调SRSF9S实验组穿过基质胶的细胞数目(81±6.11)低于对照组(246±11.06),H1299细胞下调SRSF9S实验组穿过基质胶的细胞数目(98±15.04)低于对照组(406±16.5),结果有统计学差异(p<0.000)。3.(1)选择性剪接事件5种类型在对照组shNC和实验组shSRSF9中差异均无统计学意义;(2)在A549细胞系表达上调的转录本有EFEMP1、FBXL2、PNN、RBM6,表达下调的转录本有ITGB1;H1299细胞系中表达上调的转录本有 TIAF1、QKI、EIF3E、LRRC41,表达下调的转录本有 ITGB1、MSN、PXN、RAB24、GEMIN7、PTP4A2、MRPL16、VMP1。这些转录本不仅与肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭等能力有关,还参与调节细胞骨架,前体mRNA剪接等过程;(3)对shSRSF9组中发生特有选择性剪接事件涉及到的基因进行KEGG通路分析,发现A549细胞系中这些基因主要与亨廷顿氏舞蹈病、化学致癌作用、细胞色素P450对外源性药物代谢的影响等信号通路有关。在H1299细胞中发现这些基因主要参与了 RNA转运、核糖体、泛素介导的蛋白降解、细胞周期、血管平滑肌收缩等信号通路中。[结 论]1.剪接因子SRSF9mRNA水平在肺癌样本和肺癌A549、H1299细胞系中均高表达,但其表达水平与年龄、性别以及病理类型等没有相关性;2.剪接因子SRSF9促进肺癌细胞增殖、侵袭等恶性生物学行为;3.肺癌细胞SRSF9下调表达量后对发生5种选择性剪接事件的转录本数目无明显影响;4.肺癌细胞下调SRSF9表达量导致前体mRNA剪接、肿瘤细胞相关的增殖、迁移、侵袭、细胞骨架的转录本异常表达,并且与肺癌细胞增殖侵袭生物学功能一致;5.SRSF9表达量下调后肺癌细胞发生特有选择性剪切事件涉及到的基因主要与亨廷顿氏舞蹈病、RNA转运、泛素介导的蛋白降解等信号通路有关。