乳腺癌是全世界女性肿瘤中发病率和致死率均为第一的肿瘤,其分子亚型之一的三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer,TNBC）因缺乏明确的分子靶点成为乳腺癌治疗的首要难点。寻找可靠的生物标记物来识别TNBC是靶向治疗TNBC首先要解决的问题。目前,TNBC相关非编码RNA标记物研究成为该领域的热点。环状RNA（circular RNA,circRNA）是一类重要的非编码RNA,很多研究都表明circRNA参与细胞结构与功能、基因表达与调控及信号通路等生命过程,且在癌症的发生和发展中发挥重要作用。虽然多项研究已经报道了与乳腺癌发生发展相关的circRNA,但是目前关于circRNA在三阴性乳腺癌与非三阴性乳腺癌中的差异性表达与特异性表达的研究还不足,本课题通过分析TNBC与癌旁组织的测序结果,筛选出TNBC与癌旁组织差异表达circRNA进行生物信息学分析,并探究所筛选出的circMYO9B在参与到促进TNBC发生发展中生物学功能与分子机制。课题组收集到来自北京大学深圳医院乳腺与甲状腺外科共41组TNBC患者的癌及癌旁组织临床样本,其中一组用于circRNA测序分析;十株人乳腺癌细胞系,其中五株为三阴性来源（BT-549,MDA-MB-468,Hs578T,MDA-MB-231,HCC1937）、五株为其他亚型乳腺癌细胞株（MCF-7,MDA-MB-435,T47D,SK-BR-3,BT474）及一株正常的乳腺上皮细胞 MCF-10A。circRNA 测序分析的结果表明,hsacirc0000907（circMYO9B）在TNBC组织中的表达最高。实时荧光定量PCR检测circMYO9B在所有细胞株和临床样本中的表达水平,发现circMYO9B的表达水平在TNBC组别的细胞株中与非TNBC组别的细胞株有统计学差异,该结果在临床样本中得到了验证。接着,课题组通过转染小干扰RNA的方法,即siRNA,敲低了 circMYO9B在MCF-7、BT-549、MDA-MB-468中的表达。细胞功能学实验检测敲低circMYO9B后细胞功能的变化,包括CCK8检测细胞增殖,transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭和迁移。细胞功能学实验结果表明敲低circMYO9B可以抑制TNBC的细胞增殖、侵袭及迁移。流式细胞术检测敲低circMYO9B后对MCF-7、BT-549、MDA-MB-468细胞周期和凋亡的影响,结果证实敲低circMYO9B产生的抑制三阴性乳腺癌细胞增殖效应是通过抑制周期途径发挥作用。目前很多研究表明,circRNA调控肿瘤的发展是通过miRNA海绵作用进而调控下游靶基因的,即circRNA/miRNA/target gene轴的作用影响肿瘤的发生发展。课题组通过生物信息学预测网站预测circMYO9B可能结合的下游miRNA及miRNA可能结合的下游target gene,结合target gene在乳腺癌中的预后分析,利用分子机制实验包括miRNA转染、载体构建,双荧光素酶实验检测circMYO9B与miRNA的结合及miRNA与target gene的结合。双荧光素酶实验发现,在BT-549、MDA-MB-468细胞中,circMYO9B可以与miR-576-3p结合,miR-576-3p可以与下游靶基因RAB2A结合。生存分析结果显示,circMY09B与RAB2A的表达水平与TNBC患者生存率呈负相关,而miR-576-3p的表达水平与TNBC患者生存率呈正相关。Spearman相关性分析探究circMYO9B,miR-576-3p及RAB2A三者在三阴性乳腺癌细胞中的表达水平。结果表明,在TNBC细胞株中,circMYO9B的表达与miR-576-3p的表达呈负相关,而与RAB2A的表达呈负相关。转染miR-576-3p inhibitor至BT-549、MDA-MB-468中,发现miR-576-3p inhibitor 可以逆转 si-circMYO9B 对 BT-549、MDA-MB-468 产生的抑制增值效应及逆转RAB2A蛋白表达。综上所述,circMYO9B通过circMYO9B/miR-576-3p/RAB2A轴参与到了促进三阴性乳腺癌细胞发生发展的过程中。