论文部分内容阅读
乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)感染可导致急、慢性肝炎,肝硬化并最终发展成肝癌,在HBV感染过程中,病毒变异对病程进展起重要作用。乙型肝炎病毒剪接特异蛋白HBSP(hepatitis B spliced protein,HBSP)由2447 nt-489 nt单剪接型2.2 Kb HBV剪接变异体编码产生,被认为与肝炎慢性化及肝纤维化有关,但该蛋白的具体致病机制尚未完全阐明,本实验室前期利用细胞质酵母双杂交发现HBSP可以与转化生长因子诱导蛋白1(transforming growth factor-β1-induced transcript 1,TGFβ1I1,也称为Hic-5)相互作用,而后者可促进肿瘤细胞发生上皮间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)。本研究由慢病毒感染筛选获得的稳定表达HBSP肝癌细胞株:Huh7-HBSP-flag-HIV及其对照细胞株Huh7-flag-HIV。在5ng/mlTGF-β1分别诱导二者24小时后记录诱导前后细胞形态的改变发现Huh7-HBSP-flag-HIV细胞株诱导后细胞形态由紧密的上皮形态变为松散的间质形态;进而提取细胞总蛋白,以EMT标志特异性抗体检测分子水平的变化,观察到上皮标志物E-cadherin、Claudin-1、β-catenin表达量下降,而间质标志物N-cadherin表达上升;然后转染TGFB1I1特异性siRNA,同样检测上述EMT指标的改变,各指标相对未转染之前发生逆转;最后以划痕实验和侵袭小室实验分别检测细胞迁移与侵袭能力的变化,可见Huh7-HBSP-flag-HIV细胞株相对对照株迁移侵袭能力增强。本研究证实乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白HBSP与TGFB1I1相互作用促进TGF-β1诱导的肝癌细胞上皮间质转化并增强其侵袭迁移能力。