【摘 要】
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目的:本研究体外培养小鼠肾小球系膜细胞（MCs）,通过糖肾宝含药血清干预和转染Ets-1-si RNA,观察高糖环境下糖肾宝含药血清对小鼠肾小球系膜细胞增殖及Ets-1、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、Ⅳ型胶原（ColⅣ）、纤黏蛋白（FN）表达的影响,探讨中药复方糖肾宝对糖尿病肾病（DN）的影响和作用机制,为中医药防治DN提供新的思路和作用靶点。方法:分别将中药复方糖肾宝及蒸馏水对SPF小鼠进
【基金项目】
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2015年国家自然科学基金项目（项目批准号:81573906）；
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目的:本研究体外培养小鼠肾小球系膜细胞（MCs）,通过糖肾宝含药血清干预和转染Ets-1-si RNA,观察高糖环境下糖肾宝含药血清对小鼠肾小球系膜细胞增殖及Ets-1、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、Ⅳ型胶原（ColⅣ）、纤黏蛋白（FN）表达的影响,探讨中药复方糖肾宝对糖尿病肾病（DN）的影响和作用机制,为中医药防治DN提供新的思路和作用靶点。方法:分别将中药复方糖肾宝及蒸馏水对SPF小鼠进行灌胃,制备含药血清与正常血清,然后体外培养小鼠肾小球系膜细胞,设计合成Ets-1-si RNA并转染系膜细胞。实验分为6组:正常对照组、高糖组、高糖+糖肾宝血清组、Ets-1-si RNA组、Ets-1-si RNA+糖肾宝组、空转组。药物干预72h后,采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测各组细胞中Ets-1、MCP-1、FN及ColⅣm RNA水平和蛋白表达;CCK-8法检测24h、48h、72h、96h、120h各培养时间点系膜细胞增殖情况。结果:1.高糖环境1下糖肾宝含药血清和转染Ets-1-si RNA对小鼠肾小球系膜细胞增殖的影响:与正常组比较,高糖组和空转组小鼠肾小球系膜细胞各培养时间点OD450均显著升高（P＜0.01）。与高糖组比较,添加糖肾宝含药血清和转染Ets-1-si RNA后,高糖+糖肾宝组和Ets-1-si RNA组小鼠肾小球系膜细胞各培养时间点OD450均显著下降（P＜0.01）,与空转组比较无差异（P＞0.05）。Ets-1-si RNA组和Ets-1-si RNA+糖肾宝组无差异（P＞0.05）。2.高糖环境下糖肾宝含药血清和转染Ets-1-si RNA对小鼠肾小球系膜细胞Ets-1、MCP-1、Co IV及FN蛋白和m RNA表达的影响:与正常组比较,高糖组和空转组Ets-1、MCP-1、Co IV及FN蛋白和m RNA表达量显著增加（P＜0.01）。与高糖组相比,添加糖肾宝含药血清和转染Ets-1-si RNA后,高糖+糖肾宝组和Ets-1-si RNA组的Ets-1、MCP-1、Co IV及FN蛋白和m RNA表达量均显著下降（P＜0.01）,与空转组比较无差异（P＞0.05）。Ets-1-si RNA组与Ets-1-si RNA+糖肾宝组Ets-1、MCP-1、Co IV及FN的蛋白和m RNA表达量无明显差异（P＞0.05）结论:1.高糖环境能明显促进小鼠肾小球系膜细胞增殖,显著增加Ets-1、MCP-1、Co IV及FN蛋白和m RNA表达。2.糖肾宝含药血清和转染Ets-1-si RNA能显著降低高糖诱导的系膜细胞增殖,下调Ets-1、MCP-1、Co IV及FN蛋白和m RNA表达3.糖肾宝对糖尿病肾病的作用机制可能是通过抑制Ets-1/MCP-1信号通路,下调Ets-1、MCP-1、Co IV及FN的表达有关。
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